动相要使用超纯水(18.2MΩ)，使用0.45um水性滤膜过滤，并超声后置于清洁的溶剂瓶内，将溶剂过滤头浸没入溶剂瓶中。 洗针溶剂（溶剂（Needle Wash）推荐列表：推荐列表： 色谱条件 色谱条件 缓冲含水，反相 非水，反相 正相系统 GPC 离子交换
针头清洗溶剂 针头清洗溶剂 80%有机相，20%水相 100%甲醇 流动相 流动相 超纯水
。 柱塞杆清洗液（柱塞杆清洗液（Seal Wash）要求：要求：反相系统建议使用80%水/20%甲醇（或乙腈）
2、样品溶液：样品溶液： 待测样品要求澄清、透明，如有固体悬浮物或微粒，需以0.45um微孔滤膜过滤或高速离心方式除去。 *注意：针对不同样品溶液适当选择滤膜，分清水系或是有机系滤膜。 3、开机顺序：开机顺序： 首先打开控制仪器电脑，待电脑完全加载完毕后，再开启e2695、2489、2424【打开2424电源之前，一
定要打开空气压缩机或氮气阀门】，等待所有仪器自检通过后，方可启动仪器控制软件Empower 。 注意：系统默认用户名为system、密码为manager，可新建用户名，至少4个字母。 4、仪器准备：仪器准备： 4.1、.1、e2695初时画面e2695初时画面：初时画面： E2695开机自检完成后，将进入Idle模式，真空脱气机自动开启，所以最好在开启e2695前把所需要的溶
剂准备好，暂时不使用的流路建议保存于有机相中【A路-黄、B路-蓝、C路-红、D路-绿】。 下图为e2695泵（溶剂管理）部分的流路示意图。 下图为e2695进样器部分的流路示意图 4.2、溶剂管理系统的前处理(Priming the Solvent Management System) Dry Prime功能：当溶剂管路中充满空气时，执行Dry Prime，您可以分别灌注各条溶剂通道。 进行dry prime的操作步骤如下： A、确定溶剂管路放在正确溶剂瓶中，确认检测器废液管及V3白管子、黄管子直接导入废液瓶中。 B、轻轻摇动溶剂瓶内过滤头(Solvent Filter)，防止气泡附着在过滤头外表面。 C、将排液阀向反时针方向旋转半圈，将注射器插入排液阀中，用手将其贴紧阀出口，如下图所示。 D、按“Menu/Status”键，进入Status (1)画面，按“Direct Function”功能键，选择Dry Prime，按Enter，按屏
幕上您想灌注的相应流路(A,B,C,或D)键。 E、轻轻抽动注射器，直到有液体流出，重复上述操作分别灌注4个通道，然后关闭排液阀。 Wet Prime功能：当您需要更换溶剂或排气泡时使用。 A、按“Menu/Status”键，进入Status(1)画面，利用方向键将光标移至“Composition”字段，设置您需要灌注
的比例，可以单通道灌注，也可以几个通道混合灌注。 B、按“Direct Function”功能键，选择Wet Prime，按Enter，一般建议流速:5mL/min，时间:2mins。 C、重复上述之步骤直到所有溶剂做完Wet Prime。 4.3、“Purge Injector”： Purge Injector”冲洗进样器注射器及定量环冲洗进样器注射器及定量环（排除注射器中的气泡）在“Status（1）”屏幕下，光标选“Composition”，输入流动相的组成。按【Direct Function】/“Purge Injector”，默认“Sample Loop Volumes 6.0 ”，“Compression Check”选项不要选，按【OK】。 注意：2695进样针是流路的组成部分，运行中一直有流动相冲洗。进样针外部由软件控制，每次进样前用洗针液清洗。 4.4、“Prime Nee：手动清洗进样针头： Prime Needleedle dle We Wash”sh”手动清洗进样针头（每次进样前自动洗针）在【Main】/【Diag】/【Prime NdlWsh】，按【Start】，正常状况下黄色废液管会有气液混合物喷出，持续0.5分钟，完毕后【Close】、【Exit】。 4.5、“Prime Seal Wash”： .5、Prime Seal Wash”手动清洗柱塞杆（系统默认电磁阀每分钟开一次）【Main】/【Diag】/“Prime Seal Wash”，白色废液管有液体流出，按【Halt】中止、【Close】、【Exit】。 5、排气后操作：排气后操作： 排气后的色谱泵既可用于实验，根据色谱柱的不同，请逐渐提高流速到设定值，如使用缓冲盐流动相，使用前和使用后均需要用水过渡（包括排气泡操作）。 6、系统准备（系统准备（System Prep）System Prep） A、从Main（主）屏幕或Direct Function（引导功能）列表，选择System Prep（系统准备）并按Enter。 B、在System Prep（系统准备）对话框中，指定流量、组份、样品温度和猪瘟的初始化设置，然后按Next（下屏幕）屏幕键。
C、选择溶剂，然后按Next（下一屏幕）屏幕键。
D、检验溶剂瓶中有足够的溶剂且管路中充满溶剂，Start开始。
主要是对溶剂管理系统进行湿灌注、平衡及对色谱柱进行平衡。
如果从Direct function或Main画面运行System Prep，分离单元将进入空闲模式。 如果在样品组中运行System Prep，则下一个样品组功能决定分离单元下一阶段操作。
7、关机准备：关机准备： 1、 冲洗方法 a) 如果流动相使用了盐，则先用水/甲醇（或乙腈）=90/10在1ml/min流速下清洗色谱柱和系统
30分钟，再用甲醇或乙腈清洗30分钟； b) 如果流动相中没有使用盐，则用甲醇或乙腈清洗色谱柱和系统30分钟。 2. 降低流速至0，待系统压力回零后，退出Empower软件系统，关闭HPLC系统。最后，关闭计算
机及显示器电源。 8、Waters泵梯度变化曲线参考指南Waters泵梯度变化曲线参考指南：泵梯度变化曲线参考指南： 9、仪器使用注意事项：仪器使用注意事项： 9.1、.1、2489 UV2489 UV检测器按键面板：检测器按键面板：
9.2、.2、2489 UV检测器显示屏幕：检测器显示屏幕：
9.3、.3、2424蒸发光检测器显示屏幕：蒸发光检测器显示屏幕：
9.4、.4、2424 ELSD蒸发光检测器：蒸发光检测器： 喷雾器：
低流量喷雾器：0.05ml/min～0.5ml/min；
：0.3ml/min～3.0ml/min； 高流量喷雾器（标准配置）
供气要求：65psi～100psi【0.5 Mpa～0.65 Mpa】干燥、无油的氮气或空气，不推荐与其他设备共用钢瓶，以免供气不足，正常一贯30L冲满的气体，在设置25psi气压下，可持续使用40小时，气体消耗大约2LPM；
Waters 建议用水或流动相填充虹吸管。省略此步骤会导致检测器性能下降。：为防止检测器进水，请确保虹吸排放管没有弯曲或浸入收集瓶中。 9.5、.5、2424操作注意事项：操作注意事项：
A、 蒸发光散射检测器不可使用非挥发性缓冲盐，如磷酸盐，一般得到的标准曲线是非线性； B、 不同品牌的蒸发光散射方法，一般不好直接转换，设计参数不同；
C、 打开2424电源之前，必须先打开气体阀门，压力控制在0.5 Mpa～0.65 Mpa；
D、 氮气压力25～40psi，漂移管温度48～55℃（与水相比例有关），温度改变后至少稳定15分钟； E、 为使检测器正常发挥功能，检测器打开后至少稳定30分钟；
F、 关机前，确保流路中没有缓冲盐，如有缓冲盐，需要纯水无柱冲洗20分钟，再用甲醇冲洗20分钟。 G、 关机，先停流速，至少15分钟后关闭电源，在关闭供气阀门。 9.6、.6、2424通用方法设置：通用方法设置：
漂移管温度50℃, 喷雾器加热功率设置60%，虹吸排放管已注水密封，设定气体压力30psi,增益135，采样速率5Hz。
9.7、9.7、使用超声波清洗喷雾器 使用超声波清洗喷雾器
A、停止液体流动，然后取下溶剂入口管线，关闭检测器的电源，并从后面板处断开电源线。 警告：如果喷雾器加热器已经使用了一段时间，喷雾器可能很热。请先关闭检测器的电源并冷却 30 分钟，然后再触摸喷雾器。
B、轻推入喷雾器，然后逆时针旋转，使得快速拆卸管接头指向正上方，从喷雾器中取下垫圈。 C、将喷雾器竖直放在一个烧杯中，将 100% HPLC 级水或与流动相混溶的有机溶剂倒入烧杯，但不能将进气管接头或溶剂入口接头浸入水中（如下图示），将烧杯放入超声波仪中清洗10～15分钟。
D、超声清洗完毕后，将进气管子插入喷雾器右侧的快速拆卸管接头，将喷雾器竖直放在一个干燥的烧杯中，在60 psi下，向喷雾器通气5～10分钟，以吹出多余液体。
9.8、9.8、要清洗漂移管：要清洗漂移管：
A、将喷雾器的功率增加到 75%，将漂移管温度设置为 100℃。
B、取下色谱柱，用 100% HPLC 级的水以 1.0 mL/min 的速度冲洗系统 60 分钟。 C、重新安装检测器，重新设置系统的操作条件并评估色谱。
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