大鼠胰岛β细胞损伤中IL-18的作用研究

‘上海免疫学杂志，２００２年第２２卷第ｌ期文章编号：１００ｌ—２４７８（２００２）０１．００３０—０４大鼠胰岛８细胞损伤中ＩＬ—１８的作用研究洪天配，张炳勇。夏修垒（北京大学第三医院内分泌科，北京１０００８３）摘要：新生ｗｂｔａｒ大鼠离体胰岛与细胞因子孵育后，观测胰岛紊释放和一氧化氮（Ｎ０）生成的变化，并用逆转录一聚合酶链反应（ＲＴ．ＰｃＲ）观察Ｉｏｔ８受体信号链（Ⅱ，ｌｇ邱）ｍＲＮ＾的表达水平。结果表明：（１）０６２５—１０ｎＩｎ０Ｌ，Ｌ基因重组小鼠（啊）ｌｏｌ８孵育胰岛２４ｈ后，对累积的和葡萄糖刺激的胰岛素释放以及ＮＯ生成均无显著效应；（２）２００Ｕ／ｌⅡｌ基因重组大鼠（丌）７干扰素（ＩＦＮ．丫）或２５０Ｕ／Ⅱｄ基因重组人（ｒｈ）肿瘤坏死因子．ａ（ＴＨＦ＿ａ）单独存在对胰岛素释放和Ｎ０生成均无明显效应，也不能促使１０彻帅Ｌ／ＬｒⅢⅡ，１８对胰岛素释放和Ｎ０生成产生影响；（３）２００ｕ／ｌｎｌⅡＩＦＮ一７＋２５０ｕ／ＴＩｌｌｒｌｌＴＮＦ＿ａ或１５ｐ∥ＩｌｌｌｒｈⅡ，ｌＰ均明显促进Ｎ０生成和抑制胰岛素释放，而１０删ｏｌ／ＬⅡｌｌＩｏｌ８则不影响ＩＦＮ一７十ＴＮＦ．ｎ或ＩＬｌｐ的上述效应；（４）即使经ＩＬｌｐ和（或）陌Ｎ．７＋ＴＮＦＩａ或Ⅱ，１２孵育后，大鼠胰岛素瘤（ＩＩＩＮ）细胞或离体大鼠胰岛仍未见Ⅱ，１８邓ｍＲＮ＾的表达。提示Ⅱ，１８在细胞因子所致胰岛日细胞损伤中不发挥直接作用，原因是Ⅱ，１８受体在胰岛Ｂ细胞中不表达。美量词：白细胞介素１８；受体；细胞因子；胰岛中田分类号：硒８７ｌ文献标识码：ＡＴｈｅＲｏｌｅｏｆＩＬ－１８ｉｎＣｙｔｏｋｉｎｅ・ｉｎｄｕｃｅｄＩｓｌｅｔＨＯＮＧＴｉａｎ—ｐｅｉ．ｚ｝ＬＡＮＧｐ－ｃｅＵＤａｍａｇｅｍ印池ｆＢｉ“ｇ－ｙｏ“ｇ，ＸＩＡｘｉｕｏｉｎ（脚州憎ｍ。，肋勘州删哪’，Ａ枷ｗ‰ｉ雠巧蚵７ｈｌｒｄｗｅｒｅ＆蚵增１０００８３）Ａｂｓ竹ａｃｔ：ｈ塔ｕｌｉｎｒｅＩｅ鹪ｅａＩｌｄｎｉｔ五ｃ缸ｉｄｅ（ＮＯ）ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｆｒｏｍｉｓｏＩａｌｅｄｉｓｌｅｔｓｏｆｎｅｗＥ）０ｍｗｉｓｔａｒｒａｔｓｔｅｒｍｅａｓｕｒｅｄａｆ—ｉｎｃｌｌｂａｔｉｏｎ“ｔｈｏｒｗｉｔｌｌ叫ｔｃ”ｏｋｉｎｅｓ．Ｒｅｖｅ巧ｅｔ砌ｓｃｄｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｖｍｅｒ鹅ｅｃｈＢｉｎｒｅａｃｔｉ叽（ＲＴ－ＰＣＲ）ｗａｓｕｓ砌ｔｏｄｅｔｅｃｔｎｏｓｉ＂ａｌｉ砰ｃｈｉｎ（ＩＬｌ８即）．Ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄ：（１）ｎｅｒｅｗｅｒｅｓｉ印ｉ疗ｃａｎｔｅｆ－ｆｅｃｔｓｏｆ０．６２５～１０肿出Ｌ０ｆｒｅｃｏｍｂｉｎａＩｌｔⅢｕｄｎｅ（ｍ）ＩＬ广１８ｄｏｎｅｏｎ８ｃｃｕｍｕｌ８ｔｅｄｄｕｃｏｓｅ・ｃｈ且１１ｅ“ｇｅｄｉｎｓＩｌｌｊｎｒｅｌｅａｓｅａｎｄＮＯＤｒｏｄｕｃｔｉｏｎａ缸ｒ２４ｈ．（２）２００ｕ／ｒＩｌｌ他ｃｏｍｂｉｎａｎｔｍｔ（ｒｒ）ｉｎｔｅ如ｆｏｎ－７（ＩＦＮ一７）ｏｒ２５０ｕ／ｎｄｒｅｃ０ＩｎｂｊｎＢｎＩｈＩｌｍａＩｌｉｎｓＩｌｌｉｎｒｅｌｅ聃ｅａｎｄＮＯＰ１Ｄｄｕｃｔｉｏｎａｌｏｎｅ，ａｎｄｆａｉｌｅｄｔｏ（ｒｈ）ｔｕｍｏｒｎｅｃｒ０８ｉｓｆａｃｔｏｒ＿ｑ（ＴＮＦ．Ⅱ）ｈａｄｎｏｓｊｇｎｍｃａⅡｌｅ如ｃｔｓｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ《Ⅱ他ＩＬｌ８ｒｅｃｅｐｔｏｒｏｒｏｎｐ＾ｍｅｉｓｌｅｔｓｆｏｒｅ雎ｃｔｓｏｒ０ｆｌＯｎｍｏｌ／ＬⅡｎＩＬ．１８０ｎｉｎｓｕｌｉｎｒｅｌｅ８ｓｅａｎｄＮ０ｐｒｏｄｕｃｔｉ蚰．（３）ＥｉＩｈｅｒ２００ｕ／ＨｄⅢＦＮ・７＋２５０Ｕ／ＩＩｌｌｒ｝ｌＴＮＦ．ｎ１５ｐｇ／ＩＩｌｌｒｈＩＬ．１口ｓｉｇｎｍｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄＮＯｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａＩｌｄｉｎｈｉｂｉｔｅｄｉｎｓｌｌｌｉｎｒｅｌｅａｓｅ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，Ｉｏｏｒｎｍｏｌ／ＬｎｎＩＬ．１８ｄｉｄｎｏｔ皿ｏｄｕｌａｔｅｔｈｅａｂｏｖｅｅ矗ｅｃｔｓｃ８ｕｓｅｄｂｙＩＦＮ．７＋ＴＮＦ－ａｐｒ髂ｓｅｄｉｎ１２ｉｓＩｔｎｏｔＩＬ－１０．（４）ＩＬ—１８Ｒ０ｔｏｍＲＮＡｗａｓｎｏ【ｅｘ—ｏｒｒａ“ｎｓｕｌｉｎｏ毗（ｍＮ）ｃｅｌｌｓｔｈａｔｏｒｉｎａｉ鲥ａｔｅｄ嘣ｉｓｌｅｔ８．ｅｖｅｎｄｉｒｅｃｔａｆｔｅｒｅｌｐｏｓｕｒｅＩＬ广１ｐａｎｄ／ｏｒＩＦＮ－丫＋ＴＮＦ－ａＩＬｃ∞ｃｌｕｄｅｓＩＬ广１８ｄｏｅｓｎｏｔｐＩａｙＩｏｌｅｉｎｃ”ｏｋｉｎｅ．ｉｎｄｕｃｅｄｉｓｌｅｔｐｃｅｌｌｄｅｓｔｍｃｔｉｏｎｂｅｃａｕｓｅＩＬ一１８ｒｅｃｅｐＩｏｒｅ。ｐｒｅｓｓｅｄｉｎｉｓｌｅｔＢ・ｃｅｌｌｓ．１（ｅｙｗｏｒｄｓ：ｉｎｔｅｄｅｕｋｉｎ一１８；ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ｏｙｔｏｋｉｎｅｓ；ｐａｎｃｒｅａｔｉｃｉｓｌｅｔｓＩＬ．１８是新近克隆成功的细胞因子ｕｊ。ＩＬｌ８Ｒ复合体包括一条结合链ＩＬ—１８Ｒｎ和一条信号链Ｉ【广１８耶，两者均为ＩＬ．１受体家族成员【２Ｊ。业已证实．ＩＬ．１、ＩＦＮ．７和（或）ＴＮＦ．ｎ通过促进胰岛Ｂ细胞的ＮＯ生成和（或）细胞凋亡而引起Ｂ细胞选择性破坏－３Ｊ】。在非肥胖糖尿病（ＮＯＤ）小鼠胰岛炎早期阶段的胰岛中可见ＩＬｌ８ｍＲＮＡ表达【５’。提示１Ｉ广１８在细胞因子介导的口细胞破坏中可能是重要的效应分子。本文研究ＩＬ一１８和（或）上述其他细胞因子对离体大鼠胰岛功能的效应，并研究ｌＬ－１８Ｒ在胰岛口细胞中是否表达。１材料与方法１．Ｉ１．１材料基因重组小鼠（。）ＩＬ一１８和ｎｎｌＬ。１２购嗣币斗基因里驵■、眠Ｌ瑚ＪｌＬ—１５刊珊ｌＬ。１２删兰萎昙：；：嚣髫翥缸参曼品墨；署：盏１８，。。。００２：）；教育部留妻苎曼尘员皇墼差≠芝帮巴…………－基童硪耳：国家自然辩学基盘资助项目（Ｎｏ．３００４００２２）；教育部留作者简介：洪天配（１９６３．）．男，主任医师．医学博士，主要从事糖屎病学基础与临床的研究Ｈ一叫……一…一……‘７…¨’自美国Ｐｅｐｒｏｒｒｅｃｈ公司；基因重组人（，ｈ）ＩＬ—ｌｐ（４ｘ万方数据　‘上毒免疫学杂志）２∞２年第２２卷第ｌ期ｌ矿ｕ／“ｇ）由丹麦Ｎｏｖｏｎｏｒｄｉ８ｋ公司提供；基因重组大鼠（ｒｒ）ＩＦＮ．７和ｒｈＴＮＦ．口购自美国Ｇｅｎｚｖｍｅ公司；股原酶Ａ购自德国Ｂｏｅｈ五ｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司；ＲＰＭＩ１６４０培养液、ＨＢｓｓ和胰蛋白酶．ＥＤＴＡ购自美国ＧＩＢｃＯ公司；胎牛血清（Ｆｃｓ）购自美国｝Ｉｙｃｌｏｎｅ公司；亚硝酸钠购自德国Ｍｅｒｃｋ公司；ｃＤＮＡｃｖｃｌｅｏ药盒购自荷兰ＩｒＩｖｉｔｍＥｅｎ公司；６％聚丙烯胺凝胶（ｃｅｌ．Ｍｉｘ＠６）和ＩＬ广１８即的引物购自美国ＧＩＢＣＯ公司；［ａ．”Ｐ］ｄｃＴＰ（１．１１×１０ＨＢｑ／ｍｍｏｌ购自英国ＡｍｅＩｓｈａｍＰｈａｒＩｌｔａｃｉａＢｉｏｌｅｃｈ公司；其他化学试剂均购自美国ｓｉ胛公司。１．２胰岛的分离、预培养和培养３～６日龄的ｗｉｓｌａｒ大鼠，无菌取出胰腺，剪碎，经胶原酶Ａ消化后，在显微镜下用特制ｃａｄｓｂｅＷ吸管挑拣胰岛。随后．胰岛悬浮于ＲＰＭＩ１６４０培养液＋ｌＯ％ＦＣＳ中．置培养箱中３７℃预培养５～６ｄ后用于实验。经过预培养的胰岛集中后，洗涤２次。每份随机拣出１５０个胰岛，放入含有３００脚ＲＰＭＩ１“Ｏ＋０．５％人血清的４孔Ｎｕｎｃ培养板中，与ｎＩｌＩＬ．１８和（或）其他细胞因子孵育２４ｈ。培养结束后，留取上清液用于测定累积的胰岛素释放和亚硝酸盐含量；并随机拣出两份平行的各２５个胰岛，洗涤后移入含１．６７咖ｏｌ／ＬＤ．葡萄糖的ＫＲＢＢ缓冲液（内含０．２％人血清白蛋白）中３７℃孵育ｌｈ，随后移至含１６．７唧ｏｌ／ＬＤ．葡萄糖的Ⅺ＝ＬＢＢ缓冲液中另孵育２ｈ，两次孵育结束后均取上清液用于测定胰岛素；其余１００个胰岛转移至ＥｐｐｅｎｄｏＩｆ管中，离心后充分去除上清液，干冰快速冷冻后置．８０℃保存，用于提取总ＲＮＡ。１．３大鼠胰岛素瘤（ＲＩＮ）细胞的培养第１４至１９代的ＲＩＮ一５ＡＨ—Ｔ＇Ｂ细胞置人含有ＲＰＭＩ１６４０培养液＋１０％Ｆｃｓ的Ｎｕｎｃ培养瓶中，在５％ｃｏ，／９５％空气状态下３７℃培养ｌ周。细胞经用不含ｃａ２＋、Ｍ，＋的ＨＢＳＳ洗涤后，于含有胰蛋白酶．ＥＤＴＡ的上述｝ⅢＳｓ中３７℃孵育２ＩＩｌｉｎ，迅速加人ＲＰＭＩ培养液以终止消化反应。离心洗涤和收集细胞，将其悬浮于ＲＰＭＴ培养液中。２×１０６细胞“ｄＲＰＭＩ培养液故人６孔ｃｏｓＩａｆ培养板中，预培养２４ｈ后用于实验．此时细胞数已增长Ｉ倍。随后，细胞在含有或不含细胞因子的ＲＰＭＩ培养液中孵育２４ｈ．经ＨＢｓｓ洗涤２次后，用于提取总ＲＮＡ。１．４ＮＯ生成和胰岛素释放的测定测定亚硝酸盐含量来反映ＮＯ的生成情况。取上清１００“ｌ与等量万　方数据的Ｇｉｅｓｓ试剂（０．１％萘乙二胺和Ｉ％对氮基苯磺酰胺各ｌ份）混合，室温下反应１０血ｎ，用酶联仪取ＡⅧ。。测吸光度值。亚硝酸盐标准曲线由不同浓度的亚硝酸钠Ａ值绘制。检测的灵敏度为１ｕｍｏｌ／Ｌ。由标准曲线中的三点计算出的批内和批问变异系数分别为：ｌ扯ｍｏｌ／Ｌ，０．０１７和０．０９ｌ；ｌｏ弘ｍｏｌ／Ｌ，０．０１３和０．０６９；２５“ｆｎｏｌ／Ｌ，０．们５和００７３。大鼠胰岛素测定采用ＥＬＩｓＡ法。检测的灵敏度为１０ｐⅡ∞Ｌ／Ｌ。由三个已知浓度的质控得出的批内和批间变异系数分别为：４．３ｎｍ０１／Ｌ，Ｏ０４１和００８３；１１．４ｎｍ。ｌ／Ｌ，Ｏ．０３４和Ｏ０７４；２２０ｎｍｏｉ／Ｌ．Ｏ０２８和００６７。１．５逆转录一聚合酶链反应（ＲＴ．ＰｃＲ）分析将ＲＩＮ细胞或胰岛溶于ＲＮＡｚｏｌｏ液（美国ｃｉｎｎａＢｉ０【ｅｃｘ，ＡＭｓＢｉｏ￡ｅｃｈｎｏｌｏ州公司）中提取总ＲＮＡ，用‘・ＤＮＡｃｙｃｌｅｏ药盒制备ｃＤＮＡ，操作步骤均根据厂家提供的说明书进行。采用［ａ一”Ｐ］ｄｃＴＰ和固定容量（３“１）的ｃＤＮＡ稀释样品进行ＲＴ．ＰｃＩ｛反应，每个反应均以一套ＩＬｌ８郦的引物与一套转录因子ＴＢＰ或ｓｐ．１（作为内参照）的引物相结合。引物的核苷酸顺序和扩增产物大小为：ＩＬ广１８邸，５’ｃｃＡｃｃＡＧＧＡＧＴｃＴＡＴＧＣＡＧＡ们’和５’ＡｃＣＡＡＣＧＣＡＡＧＡＴＴＣＡＣＴＧＣＴ３’，１３３ｂｐ；ＴＢＰ，５１ＡＣＣＣＴＴＣＡＣＣＡＡＴＣＡＣＴＣＣＴＡＴＧ３’和５’ＡＴＧＡＴＧＡＣＴＧＣＡＧＣＡＡＡＴＣＧＣ３’，１９０ｂｐ；Ｓｐ．１，５’ＧＴＡＴＩＴＧＡＣＣＡＧＡＡＣＣＡＴＣＣ３’和５’ＴＡＣＣＴＣＡＡＡＧＧＡＡＣＡＧＡＧＴＣＣ３’．２６０ｂｐ。每个ＲＴ．ＰｃＲ反应运行３４个周期，每个周期的运行条件如下：９５℃３０ｓ，６０℃ｌ血ｎ，７２℃１＿Ｔｌｉｎ。ＰｃＲ产物在６％聚丙烯胺凝胶上进行分离。该凝胶经干燥处理后．与磷光显象储存光屏过夜暴Ｄｙｎａ玎ｕｃｓ公司）进ＩＬｌ８本身对ＮＯ生成和胰岛素释放的影响ｈ。２．ＭＥ本身对累积的或葡萄糖刺激６２５～１０ｎｍｏｌ／Ｌ丌ｎＩＬｌ８对累积的或葡萄糖刺激的胰岛露，用磷光显象仪（美国Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ行扫描。１．６统计学分析：数据以＊±ｓ表示，组同差异分析采用ｗｉｌｃｏｘｏｎ配对检验。２结果２．１离体大鼠胰岛与ⅡｎＩＬ．１８或其溶媒２一甲琉基乙醇（２一ＭＥ）孵育２４的胰岛索释放以及ＮＯ生成均无显著影响，ｏ素释放以及Ｎ０生成亦无明显效应。为了确认所用Ⅱｎｍｌ８制剂的生物活性，将离体小鼠脾细胞与《上海免痤学杂志）２００２年第２２卷第１１９５ｒ－Ⅱｎ１８和（或）脂多糖（Ｕ玲）孵育２４ｈ。０．６２５一ｌＯ效应。２００ｕ／“ＨｌＦＮ一丫＋２５０Ｕ／ＩＴｌｌｒｈＩＮＦ—ａ或１５ｐ∥ｒ｜ｌｌｒｈＩＬ。１日均显著促进ＮＯ生成和抑制累积的或１６．７ｎｍｏｌ／ＬⅡｎＩＬｌ８显著加强１ｐｇ／ＩＩＩｌｕ）ｓ诱导脾细胞释放ｒＦＮ一７，且呈剂量依赖性（资料未显示）。２．２ｌｎｍｏｌ／Ｌ葡萄糖刺激的胰岛素释放。然而，１０ｎＩｌＩＬ．１８都不能影响ＩＦＮ．７＋ＴＮＦ—Ｑ或ＩＬ一１８的ＩＬ．１８和（或）其他细胞因子对ＮＯ生成和胰岛２００ｕ／ＩＩｌｌ衄出Ｌ素释放的影响ｍＦＮ．丫或２５０ｕ／ｌｒＩｌｒｈＴ．上述效应（表１）。在另外的实验中，胰岛先与１０ＮＦ—ａ单独存在对累积的或葡萄糖刺激的胰岛素释放以及ＮＯ生成均无显著效应，且均不能促发１０Ｔ】瑚】／ＬⅡＩＩＩ【广１８或２０ｎ∥１１１ｌ皿Ｉ【广１２预培养２４ｈ，通ｈ，过更换培养液后，继续与各种细胞因子培养２４重复以上实验，所得结果完全一致（资料未显示）。ｎｍ０１几丌ＴｌＩＬ．１８对胰岛素释放和ＮＯ生成呈现任何裹１ＩＬｌＢ和（或）其他细胞因子对Ｎ０生成和胰岛蠢释放的效应ｌｎ＝６与对照组比较，・Ｐ＜０．０１；●ｐ＜Ｏ．００ｌ２．３ｒＬ一１８ＲｒｎＲＮＡ在胰岛Ｂ细胞中未见表达在然很高，但却未能见到ＩＬ．１８ＲｐｔｎＲＮＡ表达（图ｌＡ）。同样，离体大鼠胰岛在经过或未经与１５ＩＩｌｌ阳性对照细胞即正常人或Ｉ型糖尿病（ＩＤＤＭ）患者的外周血单个核细胞（ＰＢＭｃ）中．虽然转录因子ｐｇ／ｒ｝ｌＩＬ．１Ｂ（或１５０ｐｇ／１１ｌｌＩＩｌＩＬ．１８）和（或）２００ｕ／“ＴＡＴＡ结合蛋白（佃Ｐ）表达水平极低，但ＩＬ．１８邓ｒｎＲＮＡ表达则清晰可见。相反，ＲＩＮ细胞在经过或未经与１５０ｐｇ／ＩＩｌｌｒｈＩＬｌｐ和（或）２００ｕ／“耐ＦＮ．７＋２５０ｕ／ⅡＩＩ耐ＦＮ．丫＋２５０ｕ／ＩＩｌｌｒｈＴＮＦ一Ⅱ孵育２４ｈ或与皿ｄＬ一１２孵育４８ｈ后，其转录因子ｓｐ—ｌ表达水平很高，但却未见Ⅱ．１８Ｒ８表达（图１Ｂ）。以上所有实验均重复３次，所得结果完全一致。ｒＩｌＴＮＦ＿ｑ孵育２４ｈ后，其ＴＢＰ表达水平虽圈ｌＩＬＩＢ邓ｍＲＮ＾在ＲＩＮ增胞Ｉ＾Ｉ和在■体大■晨岛（Ｂ｝中裹达的Ｒ丁．ＰｃＲ分析以人的ＰＢＭｃ作为阳性对照，Ｍｉ＝ＩＬＩＢ＋ＩＦＮ—Ｔ＋ＴＮＦ－口万方数据　（上薄免疫学杂志＇２００２年第２２卷第１期３讨论（或）细胞凋亡．从而导致选择性Ｂ细胞破坏’３ＩＬ一１４。８除可诱导Ｔ细胞产生ＩＦＮ一７外，尚有其他生Ｒ讪ｅ等１５“１发现．环磷酰胺诱导ＮＯＤ小鼠胰岛炎和糖尿病的产生以及Ｉ【广１８ｍＲＮＡ在胰岛中的表达；而在无糖尿病倾向的对照小鼠中，环磷酰胺则不能增加ＩＬ．１８的表达。ＮＯＤ小鼠１１１１胰岛炎的形成与ＩＬ一１８表达呈明显的相关性，并且ｌＬ．１８在胰岛炎中的表达明显早于ＩＦＮ．７的表达。小鼠ＩＬ一１８基因位于第９对染色体的Ｉｄｄ２区间，提示ＩＬ一１８可能是ＮＯＤ小鼠Ｉｄｄ２的易感基因之一。上述结果表明，ｌＬ一１８在细胞因子介导的Ｂ细胞破坏中可能是重要的效应分子。本文结果显示，Ｉ【广１８本身对离体大鼠胰岛的胰岛素释放和ＮＯ生成不产生任何效应。ＩＦＮ—ｙ或物学效应。在人ＰＢＭｃ的实验中，ＩＬ．１８首先促发ＣＤ３＋和ＮＫ细胞生成ＴＮＦ—ａ，后者进而刺激ｃＤｌ４’细胞释放ＩＬｌＢ和ｌＬ８旧Ｊ。Ａｎｄ托一ｓｃｈｍｕｔｚ等“的研究显示，年轻的ＢＤｃ２．５ＴｃＲ转基因小鼠具有胰岛炎，但无糖尿病的表现。环磷酰胺处理后在所有动物中均引发糖尿病的出现，呈快速和高度可重复性的特征。在此动物模型中，ＩＬ一１８、ＩＬ一１２和ＴＮＦ—ａ是关键性的细胞因子，其表达与单核细胞浸润几乎同时出现，且其相互之问的协同作用是胰岛炎向糖尿病发展过程所必需，而其他细胞因子如ＩＬ．呱ＩＬ６和ＩＦＮ一７则随后产生，以发挥对胰岛８细胞的直接毒性效应。综上所述，ＩＬ．１８在细胞因子所致胰岛Ｓ细胞损伤中不发挥直接作用，原因是ＩＬ．１８Ｒ在胰岛８细胞中不表达。参考文献【ｌＪ州Ｆ．ｎ单独存在均不能影响离体大鼠胰岛的功能，也不能促发离体胰岛对ＩＬ一１８产生任何反应。ＩＦＮ．７＋州ｐｄ或ＩＬ．１口均显著促进ＮＯ生成和抑制胰岛素释放，ＩＬｌ８则对ＩＦＮ一７＋ＴＮＦ—ａ或ＩＬ一１８的上述效应无调节作用，即使先经ＩＬ．１８预处理２４ｈ后，仍然见到相同的现象。ＩＬｌ８和ＩＬ广１２在促进１１１１细胞产生ＩＦⅣｏ方面具有协同作用，这是因为ＩＬｌ２可诱导该细胞表达ＩＬｌ８Ｒ口Ｊ。然而．ＩＬ．１２预培养却不能促使ＩＬ广１８对胰岛素释放以及ＮＯ生成产生效ｏｋ㈣Ｈ。ＴｗｔｓｕＩｔｈｍＩＩ’ｄｕｃｅ８Ｉ刚一７１０３：１１Ｈ。Ｋ０ｍａ岫Ｔ。ＨｂｙＴｄｃｈｎ咄ｎｆ…ｃ一出珊ｅｃｌＪｎｐｒｏｄｕｃｔｌｏｎｅｅｕ９［Ｊ］．ＮⅢｕｍ．１帅５，３７８：ｇｓＪ＾ｌｋｌ甚ｙ［２］Ｄｊｎ・商１０ｃ＾．ＩＬｌ８：ａｎ州Ⅱ”ｒｎｂｅｒ０ｆｔｈｅＩＬｌｈｍｊｌｙ［Ｊ］ｎｌ・ｉｎｄｕｅｉ“ｇ．Ｐ丁…兀ｎ—ａｔｏｑ。一ｏｋｉ…ｎｄＩｍ…１．１９９９。［３］应，亦不能促使ＩＬｌ８对ＩＦＮ吖＋ＴＮＦ—ａ或ＩＬ广１Ｂ抑制胰岛素释放和促进ＮＯ生成的效应产生任何调节作用。ＲＴ．ＰｃＲ分析显示．编码ＩＬ．１８ＲＢ的ｒｎＲＮＡ在ＲＩＮ细胞或离体大鼠胰岛中均未见表达，即使经ＩＬ—ｌＢ和（或）ＩＦＮ一丫＋ＴＮＦ—ａ或ＩＬ一１２孵育后，仍是如此。上述结果表明，ＩＬｌ８Ｒ在胰岛口细胞中不表达，故ＩＬ—１８在细胞因子所致胰岛Ｂ细胞损伤中不发挥直接效应。ＩＬｌ、ＴＮＦ—ａ和（或）ＩＦＮ．７通过诱导ＮＯ合成和（上接第６５页）．５ｊ［４Ｊ高洪伟，洪天配．李琼芳烟酰胺对白细胞介素１０所致胰岛损伤的保护作用及其机制（Ｊ）中华医学杂志．１９９６．７６：４９７Ｍ曲ｄｍｐ—ＰｏⅢ”ｎＴＴ１ｌｅｍｌｅ０ｆ洫ｅｄｅｕｋｌｎ—ｌｌｎＩＤＤＭ［Ｊ］Ｄｉ４ｋｔｄｏｇｉＢ．１９９６，３９：１０∞［５］ＲｏＬｈｅ出止ｅｌｅ日ｉ８够㈣Ｉ甜ｗ１血ｌｈｅｅｘｍ∞ｌｏｎｗｈｉｃｈＨ．Ｊｅｎｋｉ衄ＮＡ，ｃｏｐｅＩ蚰ｄＮＧ．ｄｄｔｈ。ｐ４ｔｈｏｇ一…ｆＡｃ价ｅｓＬ８胪ｏｆａｕｔｏｉ…ｎｅｐ。０ｄｕｃｕｏｎｏｆｉ｜ｌ嘲ｔｅｄｎｅ盯ｗｄ２【Ｊｊ．ＪＹ，ｎｄｃｌＩｎＩ…￡．１螂．９９・４６９ｏｆａｎｏｖｅｌｃ”ｏ“ｎｅ，ＩＧＩＦ．［６］ＲｏｔｌＩｅｉｎｄｕｃｉ雌ｆ叫ｏｒ（１ｃＩＦ）…ｓｄｅ”ｌ坤嘶ｎｔｏｆｌｌｌＩＪ０：２５ｊＨ．Ｈ击ｌ帅Ｔ，Ｉｍｈｅ印砰……ｖｍｖ—ｌｎｌｎ“ｉｔｉ８蛔ＮＯＤ衄ｃ亡［ＪＪ．Ｊ＾ｕｔｏ…ｕｎ．１９９７，１∞ｄＩＦＮ．７ｓｙｓｋｍｉｃｍｔ目击～７ｔｈｅ：７］＾ｎｄ畦．ｓｃｈｍｕ口Ｉ，Ｈｉｎｄｅｌ４“Ｅｃ．Ｂｅ肿ｉｓｌｃ．ｅｆ由，ｃｄ】山盯蛆ｄｍｏｌｃｃ山盯ｃｈ¨舻ｓ…”Ｐ皿一堆ｔｈｅ￡ｕｒｐｍ印５ｉｏｎｆ—ｉｎ飘ｌｌ＿ｔ】蛐ｄｌａｈＩ髑、ＪＪｌｍｍｕｎｏｌ，ｌ”，２９：２４５［９ｊｄＰ０；ｎＩⅢｕｕｃｉｏｎｎ｜Ｉ＿ｋ；“ｇＹｅｕ曲－ｓｌｌｌｗ＾Ｊ．矾。唧ＥＪ．Ｄｕｂｏｉ￥Ｇｃ．ｅｔ＾ＣＴＬ叩ｊｔｏｐｅ８Ｈｍ辞ｉｎｎｔｒｏ¨ｄｌｎＦ，Ｂｃｎ豳ｋｙＪ＾，ｃ丑ｆｂ帅ｃＤｐ，ｃｌ础１ｎｄｕｃｌｉｏｎ缸ｃ”ｏ【ｏⅫｃＴＥｍｂ。ｐｈｏｃｙ’骼州柚血ｕｍ汀ｉｍｍｕｎ｜ｔｙｃｉｃｒｒＩｉｋｗｉ出ＤＮ＾Ⅶ帆吣ｑｐ—ｓｔｉ—ｐｒｍｃｉｎ【ＪＪ６］ｋⅥｂｋ町ａｃｃ鹅１唱ｂｙ血ｅＪＩｍ—１．１９９７．１５８：３２”Ｖ。Ｈｉ帅ｌｅ∞辨ｉ【ｉｏｎ０ｆ＾ｎ｜１１一ｌｅｎｇ山出ｅｔｐｉ【。ｐ科Ｊ］ＪＩｍ咖ｎｄ．１９９６，１５６：２３６９［１０］Ｒｏｄｄ印仳Ｆ．＾ｎＬＬ，Ｈ吐ｉｎ－ｓ，ＨｄＤＮ＾ｉ…ｎｉ盟ｔｌ…ｌｔｈ…｛－ＴｏｅｌｌＪ，Ｍｌｃｈ”ｌｃ，ｋ“ｕｋｙｄ．ＩＩＩｌＩｊｂｉｔｉｏｎＬｋｉｎ”Ⅱｌ－ｌ”ｐｅｍ’ｅｇＩｏｎｏｆＥ籼ｔｄｎ－ＢａⅡ“…ｃｌｅ盯ＤＮ＾ｉｍｍｕ－０ｆ删ｊ矿ｎ印・旷㈣ｌｏｗ・ｎｔｉｖｉｒ．１５１７４ｐｒｏｔｅｃ“ｏ…Ｉｊ６ｅｄｆ”ｑ佻ｎ。ｙｏｆ—ｏ叮ｏｙ协ｔｏｎｃｌｙｍｐｈｏｃ”鹄蛆ｄｉｎ田ｊｃＩｅｎｆｈｙ山ｉｑｕｉｄ蚰曲［Ｊ］ＪＶ】丹１．１９９８．７２：如“鲫一儿川№ｌⅢｔ．１９盯。，７５：６盯７］ｃ讲Ｔ８Ｊｅｎｈ∽嗨蚰ｍ岫ｏｒｉ眦ｌ【ＩＩｌＩ竹【ＪＪ．Ｊｌ㈣ｎｄ，１９９７．１５９：椰１ｗ＆蛆“Ａ．ｓｔｉｅ柚ｄⅢＢＪ．ｃｈ卸＾Ｋ．ｄｄ．Ｅｎｈ趼ｃｄｃＴＬ确ｐｏｎｓ髑ｍｅｄｉ●ｔ副ｂｙｐｌ蛐ｉｄｅｏｎｉｍ山ｌｏｑｍ砷ｔｌｏｎＭ．而曲ｅＨ，Ｉ钟Ｄ，ｅｔｄｃ喊ｉｍｕｌａｔ；ｏ”ｐｍⅥｄｅｄｂｙ［１１］ｕ铲ｒｔｏｐｅＲ＾，Ｂ－ｒｂ盯ＢＨ．ｆ、ｔ”ｎｋｔｍｌＪｌｃ“ｐｏｍ【ｅｄｉｎｔｏ让ｅＨ一２Ｄ６？ｗ怔ｐ—ｍｄｗ汕ｎｎｔｊ萨“ｐ删ｔａｌｌｏｎ［Ｊ］．ＪＩ…ｎｄ．１９９７，１５８：６ｓ５３１９ｎｄ０ｆ…ｎｎｕ…ｎｕｃＩ∞ｐｍｔｆ…ｐ】一９。ｑｕ呲ｒ。ｑｕｌｒ幅ｔｈｅｔ…一ｃｐｎ咿－ｌ砒。ｄ岛一ｍｉ—ＤＮ＾ｉｍｍｕｎｏ萨…ｎｃｏｄｌｎｇｊ咖ｌ犯山髑＾捌ｃｎｏｋ一【ＪＪＩ删ｎｏｌ，ｌ嘶，１５８：４５９ｌ［１２］ｕｇｃ‘Ｒ＾，Ｂ曲吖ＢＨ．ｃ嘲ｌｊＩｌｇｃｑｄｏｋｄｉｎｃｏｎ￥ｔｒＩｌｃｔｓｌＪＪｃ１１。ｌａｒｇｅＩＢｗｎｈＪＩｍｍｕｎｄ．１９９８，１６０：１５９８万方数据