RP-HPLC法测定酮甲霜中酮康唑和甲硝唑的含量

２０１０年４月第７卷第１２期　・药品鉴定・　Ｒ　Ｐ—Ｈ　Ｐ　ＬＣ法测定酮甲霜中酮康唑和甲硝唑的含量　王晓燕．高丹　（解放军第二三。医院，辽宁丹东１１８０００）　ｆ摘要】目的：建立反相高效液相法测定酮甲霜中酮康唑和甲硝唑含量的方法。方法：采用Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ－Ｃｔｓ（４．６　ｍｍｘ２５０　ｍｍ，　５　ｍ）色谱柱；流动相：甲醇一水（７４：３６）；检测波长：２３９　ｎｍ；流速：１．０　ｍｌ／ｍｉｎ。结果：酮康唑在０．０６－２．１０　Ｉｘｇ范围内与　峰面积呈良好的线性关系（ｒ＝Ｏ．９９９　５），平均回收率为９８．８９％，ＲＳＤ＝１．４０％；甲硝唑在０．０６－２．１０　Ｉｘｇ范围内与峰面积　呈良好的线性关系（ｒ－＝Ｏ．９９９　１），平均回收率为９８．７５％，ＲＳＤ＝１．１０％。结论：本方法简便、准确、重现性好，可用于酮甲　霜中酮康唑和甲硝唑的质量控制。　【关键词】反相高效液相法；酮甲霜；酮康唑；甲硝唑；含量测定　冲图分类号】Ｒ９２７。２　【文献标识码】Ｂ　［文章编号】１６７３—７２１０（２０１０）０４（ｃ）－０７９－０２　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ　ａｎｄ　ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ　ｉｎ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄ　Ｋｅ－　ｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ　Ｃｒｅａｍ　ｂｙ　ＲＰ—Ｈ］ｆ．ＬＣ　ＷＡＮＧ　Ｘｉｏｏｙａｎ￣，ＧＡ０　Ｄａｎ。　（Ｔｈｅ　ＰＬＡ　２３０ｔｈ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｄａｎｄｏｎｇ　１　１８０００，Ｃｈｉｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ　ａｎｄ　ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ　ｉｎ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄ　Ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ　Ｃｒｅａｍ　ｂｙ　ＲＰ—ＨＰＬＣ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ　Ｃ１８（４．６　ｍｍｘ２５０　ｍｍ，５　ｍ）ｃｏｌｕｍｎ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ．Ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅｓ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ　ｏｆ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ　ａｎｄ　ｗａｔｅｒ（７４：３６），ｔｈｅ　ｌｆｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１．０　ｍｌ／ｍｉｎ　ａｎｄ　ｈｅｔ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　ａｔ　２３９　ｎｌｎ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ　ｗａｓ　ａｔ　０．０６－２．１０　Ｉｘｇ（ｒ＝０．９９９　５），ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　Ｗａｓ　９８．８９％ｗｉｔｈ　ａ　ＲＳＤ　ｏｆ　１　Ｉ４０％；ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ　Ｗａｓ　ａｔ　０．０６—２．１０　ｘＩｇ（ｒ＝０．９９９　１），ｔｈｅ　ａｖｅｒｇｅａ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９８．７５％ｗｉｔｈ　ａ　ＲＳＤ　ｏｆ　１．１０％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｆａｓｔ．ｒｅｌｉａｂｌｅ。ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ　ａｎｄ　ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ　ｉｎ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄ　Ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ　Ｃｒｅａｍ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］ＲＰ—ＨＰＬＣ；Ｃｏｍｐｏｕｎｄ　Ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ　Ｃｒｅａｍ；Ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ；Ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ；Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　酮甲霜是我院研制的含酮康唑和甲硝唑的皮肤外用制　剂，酮康唑和甲硝唑具有抗真菌作用『ｌ１，临床上用于治疗体　癣、牛皮癣、湿疹以及神经性皮炎等Ｉ２］。酮康唑和甲硝唑的含　匀，分装。即得［６－７］。　２．２对照品溶液的制备　精密称取酮康唑对照品和甲硝唑对照品适量，加甲醇溶　量测定有电位滴定法、紫外一可见分光光度法［３１。本文建立了　解。并制成含酮康唑１．０　ｍｇＣｍ］和甲硝唑１．０　ｍ￣Ｊｍ］的对照品　溶液。　２．３供试品溶液的制备　以ＨＰＬＣ法同时测定酮甲霜中酮康唑和甲硝唑两组分含量　的方法　。现介绍如下：　１仪器与试药　取酮康唑适量，加无水乙醇于８０℃水浴加热溶解，冷却　高效液相色谱仪（ＨＩＴＡＣＨＩ，７１１０），酮康唑原料（南京白　敬宇制药有限公司生产，ＫＥ一０７１１１５）；甲硝唑原料（武汉武　放置量瓶中，用乙醇加至刻度，冰浴２　ｈ，滤过，配制成含酮康　唑５０　ｇ／ｍｌ和甲硝唑５０　ｘＩｇ／ｍｌ的供试品溶液。　２．４阴性对照品的制备　药制药有限公司生产，Ｃ０４一Ｌ０７０６２２６）；酮康唑对照品（中国　药品生物制品检定所．批号：１００２９４—２００６０２）；甲硝唑对照品　（中国药品生物制品检定所，批号：１００１９１—２００３０５），酮甲霜　按处方比例，取除酮康唑和甲硝唑的其他试药，按“２．１”　项下方法制成缺酮康唑和甲硝唑的阴性样品，再按“２－３”项　下方法制成阴性对照品溶液。　２．５色谱条件　（解放军第二三。医院的医院制剂，含酮康唑和甲硝唑分别是　１％）。其他试剂为色谱纯。　２方法与结果　２．１酮甲霜的制备　色谱柱：Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ　Ｃｌ８（４．６　ｍｍｘ２５０　ｍｍ，５　ｍ），流动相：　甲醇一水（７４：３６），流速：１．０　ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长：２３９　ｎｍ，柱温：　３０℃，进样量：２０　ｌ。　２．６系统适用性试验　按照处方组成（酮康唑１　ｇ、甲硝唑１　ｇ、氮酮２　ｒｎｌ、乙二　胺四乙酸二钠０．０５　ｇ、乳膏基质加至１００　ｇ）分别称取酮康唑、　甲硝唑研磨过６号筛（８０～１００目），置乳钵中，加氮酮、乙二　胺四乙酸二钠研磨均匀．按等量递加法加入基质中。充分研　【作者简介】王晓燕，女，主管药师，大学本科；现就职于中国人民解放军　第二三。医院　分别取酮康唑和甲硝唑对照品溶液、供试品溶液及阴性　对照品溶液，按上述色谱条件进行试验，考察系统适用性。　ＨＰＬＣ色谱图见图１。由图１可知，酮康唑和甲硝唑能够有效　的分离．空白基质没有干扰。　ＣＨＩＮＡ　ＭＥＤＩＣＡＬ　ＨＥＲＡＬＤ巾自基药售报７９　药品鉴定・　Ｂ　图１　ＨＰＬＣ色谱图　（Ａ．对照品；Ｂ．供试品；Ｃ罔性对照；１．甲硝唑；２，酮康唑）　ｎｇ．１　ＨＰＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｆＡ．Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ；Ｂ．Ｓａｍｐｌｅ；Ｃ．Ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ；１．ｍｅｔｒｏｎｉｄａｚｏｌｅ；　２．ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ）　２－７线性关系考察　分别精密量取对照品贮备液１．５、２．０、２．５、３．０、３．５　ｍｌ，置　于５０　Ｉｌ１ｌ量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别精密量取　２０　ｌ，分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定色谱峰面　积，以进样浓度（　ｇ）为横坐标，峰面积为纵坐标，计算回归方　程，结果表明酮康唑进样量在０．０６～２．１Ｏ　ｇ范围内，呈良好　的线性关系，回归方程为Ｙ＝２４　６１６Ｘ一１３５　４６９（ｒ＝０．９９９　５）；　甲硝唑进样量在０．０６—２．１０　ｇ范围内，呈良好的线性关系，　回归方程为ｙ＝１６　９１５Ｘ一１　１３　２４２（ｒ＝０．９９９　１）。　２．８精密度试验　精密吸取“２．２”项下对照品溶液２０　ｌ，重复进样５次，　按上述色谱条件测定色谱峰面积，酮康唑的ＲＳＤ为１．３４％，　甲硝唑的尉　为１．５０％。结果表明本法精密度良好。　２．９稳定性试验　取“２．３”项下供试品溶液，分别于放置０…２　４　６、８、１２　ｈ　后，注入液相色谱仪，测定色谱峰面积，酮康唑的ＲＳＤ为　１．２７％，甲硝唑的ＲＳＤ为１．６５％，结果表明供试品溶液在１２　ｈ　内基本稳定。　２．１０重复性试验　精密称取同一批样品５份，按“２．３”项下方法制备供试　品溶液，分别测定色谱峰面积，酮康唑的平均含量为１．８２％，　ＲＳＤ为０．４％；甲硝唑的平均含量为２．０５％，ＲＳＤ为０．３％。结　果表明本法重复性良好。　２．１１回收率试验　分别精密称取酮康唑和甲硝唑对照品适量，按处方比列　８Ｏ由曹医商弓报ＣＨＩＮＡ　ＭＥＤＩＣＡＬ　ＨＥＲＡＬＤ　２０１Ｏ年４月第７卷第ｌ２期　加入基质中制成含酮康唑、甲硝唑含量分别约为标示量的　８０％、１００％、１２０％的样品。按回归方程，测定并计算回收率。　结果见表１。　表１　回收率试验（ｎ－－３｝　Ｔａｂ．１　Ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ（　３）　］ＩＩＡ￣＇（ｍｇ）　测得量（ｍｇ）　回收率（％）平均回收率（％）　ＲＳＤ（％）　酮康唑甲硝唑酮康唑甲硝唑酮康唑甲硝唑酮康唑甲硝唑酮康唑甲硝唑　２．１２样品含量测定　取本品约ｌ　ｇ（约相当于酮康唑１０　Ｉｎｇ、甲硝唑１０　ｍｇ），　精密称定，加无水乙醇适量。置８０℃水浴中溶解，放冷至室　温，移至１００　ｒｉｄ量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，冰浴　冷却２　ｈ后，滤过，弃去初滤液，取续滤液２５　ｒｎｌ用乙醇稀释　至５０　ｍｌ，进样２０　１，计算含量，结果见表２。　表２样品含量测定ｆ，阖）　Ｔａｂ．２　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅｓ　３讨论　本方法简便，准确，空白基质没有干扰，可用于酮甲霜中　酮康唑和甲硝唑的含量测定。　【参考文献】　［１］林傧，陈俊杰，林建武，等．复方酮康唑乳膏治疗外耳道真菌病疗效观察Ⅱｌ　中国医药导报。２００６。３（２４）：４９．　【２】夏玉满．萘替芬酮康唑乳膏治疗手足癣疗效观察叨．中国医药导报，　２００６，３０５）：８５．　【３】国家药典委员会　中华人民共和国药典【ｓ】．二部．北京：化学工业出版　社．２００５：６１４．　【４】王海红．高效液相色谱法测定复方甲硝唑栓中甲硝唑及诺氟沙星的含　量【Ｊ】．中国医院药学杂志，２００８，２８（１）：７９—８０　［５】汪选斌．高效液相色谱法同时测定甲倍霜中甲硝唑和丙酸倍氯米松　的含量［Ｊ】．中国医院药学杂志，２００７，２７（１２）：１７７８－１７８０．　【６］卢乙众，张永恒，丁毅，等．氯霉素甲硝唑搽剂的制备及Ｉ临床应用叨．中　国医药导报，２００７Ａ（２７）：１００－１０１．　【７１赵占武．甲硝唑缓释片的制备及其体外释药的影响因素考察阴．中国　医药导报，２００７，４（３４）：６６－－６７．　【８】壬娟．ＨＰＬＣ法测定匹卡米隆分散片的有关物质　中国现代医生＇２０ｏ７，　４５（８）：６８，７７．　（收稿１３期：２００９—１２—２２）