苹果中残留拟除虫菊酯检测的前处理方法研究

江苏农业科学２００８年第４期　苹果中残留拟除虫菊酯检测的前处理方法研究　詹萍，田洪磊　（石河子大学食品学院，新疆石河子８３２０００）　摘要：就苹果样品中残留拟除虫菊酯农药检测的前处理条件进行了系统筛选与分析研究，研究表明，采用丙　酮：正己烷（１：１）复合溶剂、ＭＡＥ法提取、弗罗里硅土净化的前处理方法，苹果样品中残留拟除虫菊酯农药测定　回收率为８６．９％一１０１．８％，检测精密度和灵敏度高，变异系数为３．２８％一８．８２％。　关键词：苹果；残留拟除虫菊酯；检测；前处理　中图分类号：Ｑ６５２　文献标志码：Ａ　文章编号：１００２—１３０２（２００８）０４—０２６５—０４　农药残留分析的第一个环节就是从样品中提取　和净化残留的痕量农药¨Ｊ，提取的质量与净化程度　直接影响到分析结果的准确性。目前在农药分析中　经常使用的分析方法有薄层色谱、气相色谱、液相色　１．２．２主要仪器设备气相色谱仪（意大利Ｔｒａｃｅ　ＧＣ２０００），组织匀浆机（金坛市富华仪器有限公司），　恒温水浴锅（江苏正基仪器有限公司），ＢＳＺ一２型　纯水系统（上海博通自动双重纯水蒸馏器），机械振　荡器（金坛市富华仪器有限公司），超声波清洗器　（昆山市超声仪器有限公司），ＲＥ一５２ＡＡ型旋转蒸　谱、色质联用等技术，一般均要求分析较净化的样　品，否则存在的大量杂质会对农药残留的分析造成　干扰或阻碍，因而提取、浓缩、净化是残留农药分析　中一个重要的检测前处理过程　Ｊ。　本试验在前人工作的基础上，就苹果样品中残　留的拟除虫菊酯检测的前处理条件进行了系统筛选　与分析，其中包括提取溶剂、提取方法（ＭＡＥ法、超　声波提取法、机械振荡提取法、均质加溶剂提取法　等）、净化方法（液液萃取法、柱层析法和浓硫酸磺　化法等）的筛选与分析。　１材料与方法　发器（上海亚荣生化仪器厂），ＷＬＺＳ一１型微波炉　（南京三乐高新技术工程公司微波所），ｐＨＳ一３Ｃ型　精密ｐＨ计（上海雷磁新泾仪器有限责任公司）。　１．３试验方法　１．３．１拟除虫菊酯类农药标准曲线的制备农药　标准储备液：甲氰菊酯，１００　ｇ／ｍｌ；氯氟氰菊酯，１００　ｇ／ｍｌ；联苯菊酯，１００　ｇ／ｍｌ；氯氰菊酯，１００　ｇ／ｍｌ。　吸取一定量的标准储备液，用乙腈稀释，使混合溶液　中４种农药标准品的浓度均为５　ｇ／ＩＩｌｌ。用混合标　准储备液分别配置出０．０５、０．１０、０．２０、０．５０、１．００　ｇ／ｍｌ的混合标准溶液，各取２　ｌ，用ＧＣ—ＥＣＤ测　定，以峰面积为横坐标，含量为纵坐标，作出标准曲　线，并求出回归方程。　１．３．２苹果样品残留农药检测前处理方法的确定　１．１供试材料　供农药残留分析的富士苹果由陕西华圣果业有　限公司提供，来源于洛川、旬邑、宜川三大苹果产区。　１．２试剂与设计　１．２．１　主要试剂正己烷、二氯甲烷、丙酮、石油醚　（沸程６Ｏ～９０℃）、甲醇、乙酸乙酯、苯、甲苯、乙醚、　浓硫酸、浓盐酸、无水硫酸钠、氯化钠等试剂，均为国　产分析纯；拟除虫菊酯标准品（Ｆｌｕｋａ公司），弗罗里　硅土（Ｆｌｕｋａ公司）。　收稿１３期：２００８一Ｏｌ—Ｏ８　基金项目：石河子大学高层次人才基金（编号：３０３７０８１６）。　１．３．２．１苹果样品中农药残留提取方法提取溶　剂选择　：准确称取１０．０　ｇ匀浆的苹果样品，加入　高、中、低３个浓度的混合农药标准溶液，分别选取　纯溶剂乙腈和混合溶剂丙酮：水＝８：１、丙酮：正　己烷＝１：１作为提取溶剂处理样品，其他处理条件　固定。每个样品做３个平行，分别测定样品中拟除　作者简介：詹萍（１９８ｌ一），女，陕西西安人，硕士，讲师，研究方向　虫菊酯类农药回收率，选择回收率高且便于后续操　作的试剂作为本试验的提取剂。提取方法选择：分　别选用机械振荡法、超声波法、匀浆加溶剂提取法、　微波辅助萃取法处理苹果样品，每个样品做３个平　为食品质量安全控制。　通讯作者：田洪磊，硕士，讲师，研究方向为食品科学。Ｅ—ｍａｉｌ：　ｔｉａｎｈｏｎｇｌｅｉ＠ｓｔｕ．ｓｎｎｕ．ｅｄｕ．ｃａ。　行，比较回收率高低和操作难易程度，选择回收率高　维普资讯 http://www.cqvip.com

－－－——２６６．．．——　江苏农业科学２００８年第４期　且简便的提取方法作为本试验的提取方法。　１．３．２．２农药残留粗样的净化方法采用中性氧　化铝、弗罗里硅土和活性炭３种填料的柱子对净化　效果做对比试验。３种填料层析柱的条件分别为氧　化铝柱：内径１　ｃｍ，下层填少量脱脂棉，然后依次放　１　ｅｍ无水硫酸钠，３　ｅｍ层析用中性氧化铝，１　ｅｍ无　水硫酸钠；弗罗里硅土柱：内径１　ｅｍ，下层填少量脱　脂棉，然后依次放１　ｅｍ无水硫酸钠，５　ｇ层析用弗罗　里硅土，１　ｅｍ无水硫酸钠；活性炭柱：内径１　ｅｍ，下　层填少量脱脂棉，然后依次放１　ｅｍ无水硫酸钠，５　ｇ　活性炭，１　ｅｍ无水硫酸钠。净化时先用１０　ｍｌ条件　化淋洗液淋洗柱子，等条件化淋洗液的上层剩少许　时，弃去流出液，加入样品，用干净烧杯接淋洗液，再　用固定体积每次５　ｍｌ淋洗液淋洗样品进行净化。　每个样品做３个平行，比较回收率和操作的难易程　度，选择简便、回收率高且图谱中杂质峰少的方法作　为本试验的净化方法。　１．３．３　拟除虫菊酯气相色谱操作条件　ＧＣ配　ＥＣＤ检测器；色谱柱：ＳＰＢ一６０８（３０　ｍ　Ｘ０．３２　ｍｍ　Ｘ　０．１０　Ｉ，ｚｍ）；进样口温度：２３０　ｃＩ＝；检测器：２５０　ｃＩ＝；柱　升温程序：初始１６０　ｃＩ＝，保持１　ｍｉｎ，１０￣Ｃ／ｍｉｎ升至　２６０　ｃＩ＝，保持８　ｍｉｎ；载气：高纯Ｎ２（＞９９．９９％），２．３　ｍｌ／ｍｉｎ；空气：６０　ｍｌ／ｍｉｎ；进样方式：不分流１　ｔｘｌ　进样　２结果与分析　２．１　拟除虫菊酯类农药标准曲线　根据４种拟除虫菊酯农药标准品的浓度梯度和　测得的相应的峰面积，制作４种拟除虫菊酯农药标　准曲线，见图１、图２、图３、图４。由上图１至图４可　以看出，４种拟除虫菊酯农药残留的色谱分析线性　良好，决定系数在０．９９３　１～０．９９８　８之间，可以满足　定量分析的需要。　目　、－，　喧　鹫　农药浓度（ｎｇ／ｍ１）　图ｌ　甲氰菊酯农药标准曲线　，　、－，　醛　喧　髫　农药浓度（ｎｇ／ｍ１）　图２联苯菊酯农药标准曲线　Ｉ　、－，　喧　髫　农药浓度（ｎｇ／ｍ１）　图３氯氰菊酯农药标准曲线　，　、－，　星　农药浓度（ｎｇ／ｎｄ）　圈４氯氟氰菊酯农药标准曲线　２．２　不同提取溶剂对苹果样品处理的影响　乙腈、丙酮：石油醚＝１：１、丙酮：正己烷＝１　：１等３种不同提取溶剂提取苹果中残留拟除虫菊　酯类农药的回收率结果见表１。从表１可见，３种溶　剂均满足农药残留分析要求。但相比之下，采用丙　酮：石油醚＝１：１作为提取剂时联苯菊酯回收率　偏低，平均回收率只有７９．６２％，且氯氟氰菊酯回收　率差别较大。综合比较，本试验选用复合溶剂丙酮　：正己烷＝１：１作为样品的提取溶剂效果较好。　２．３提取方法对苹果样品处理的影响　在选用丙酮：正己烷＝１：１复合溶剂作为提　取溶剂的基础上，分别选用超声波提取、ＭＡＥ法提　取、机械振荡提取、匀浆加溶剂提取等４种不同的提　维普资讯 http://www.cqvip.com 詹萍等：苹果中残留拟除虫菊酯检测的前处理方法研究　表１　不同提取溶剂处理对苹果中　残留拟除虫菊酯农药回收率（　＝３）的影响　械振荡提取较其他３种提取方法的回收率低，回收　率仅为６９．９２％～８１．０９％，超声波振荡提取、ＭＡＥ　法提取、匀浆加溶剂提取回收率较高，均在８５％以　上，因此该３种方法都可作为苹果样品中残留拟除　虫菊酯农药的提取方法。但超声波法需重复几次才　能达到与其他方法效果相当，匀浆加溶剂提取法测　定结果变异系数相差较大，即每次提取的回收率相　取方法处理苹果样品，每种方法做３个平行，取其平　差较大。综合比较，选用ＭＡＥ法作为苹果样品中残　均值，结果见表２。由表２可见，４种方法提取苹果　留拟除虫菊酯农药的提取方法效果较好。　中残留拟除虫菊酯都符合农药残留分析要求，但机　表２不同提取方法对苹果样品中残留拟除虫菊酯农药回收率（　＝３）的影响　注：提取溶剂为丙酮：正己烷＝１：１复合溶剂。　２．４净化方法对苹果样品处理的影响　中性氧化铝层析柱、弗罗里硅土层析柱、活性炭　柱等３种填料层析净化方法对苹果样品中残留拟除　虫菊酯农药回收率的影响结果见表３。从表３中看　出，３种净化方法的回收率均在８８．４５％以上，回收　峰号分别代表：１—联苯菊酯（３．２９８　ｍｉｎ）；　率相差甚小。但采用中性氧化铝柱净化时氯氰菊酯　２一甲氰菊酯（４．３８６ｍｉｎ）；３、４、５、６一氯氰菊　４种异构体分离效果不好，采用活性炭柱净化时氯　酯（６．０６７　ｍｉｎ、６．５７２　ｍｉｎ、６．６０８　ｍｉｎ、６．６２ｌｍｉｎ）；　氰菊酯中的１种异构体信号响应值较低，因此本试　７、８一氯氟氰菊酯（１０．０１２　ｍｉｎ、１０．６３１　ｍｉｎ）　图５拟除虫菊酯农药标品色谱图　验选用弗罗里硅土柱作为苹果样品中残留拟除虫菊　酯农药粗提液的净化方法。　————一　表３不同净化方法对苹果样品中残　图６未施药苹果空白样品色谱图　图７苹果添加拟除虫菊酯农药样品的色谱图　表示前处理方法的准确度，以变异系数表示其精密　２．５测定结果的可靠性分析　度。在苹果样品中准确添加一定量的拟除虫菊酯混　２．５．１　图谱分析拟除虫菊酯农药标准品、未施药　合标准溶液进行添加回收率试验，结果（表４）表明，　苹果空白样品和苹果添加拟除虫菊酯农药样品的色　采用本试验的前处理方法测定的苹果样品中拟除虫　谱检测结果见图５、图６、图７。结果表明，４种拟除　菊酯回收率较高，在８６．９％～１０１．８％，说明试验方　虫菊酯农药的分离效果较好，苹果添加拟除虫菊酯　法准确度高；变异系数≤８．０１％，表明试验方法精密　农药样品的色谱图峰形标准，重现性好，说明仪器条　度高，可以满足苹果中残留农药检测的需要。　件适合。　２．５．３灵敏度分析根据称样量２　ｇ、定容体积５　２．５．２测定结果精密度和准确度分析　以回收率　ＩＩｌｌ和进样体积２　ｌ，以仪器基线噪音２倍的色谱峰　维普资讯 http://www.cqvip.com 一２６８一　江苏农业科学２００８年第４期　高作为农药检出的衡量指标，确定本试验的前处理　方法对拟除虫菊酯农药的最小检出限范围是　０．００１　７～０．００３　８　ｍｇ／ｋｇ。　法，即：准确称取１０．０　ｇ匀浆的苹果样品，采用丙酮　：正己烷＝１：１复合溶剂为提取剂，按ＭＡＥ法提　取，采用弗罗里硅土层析柱净化，净化后样品用旋转　２．５、４苹果样品的测定　根据上述建立的农药残　留量的气相色谱测定方法，对洛ＪｌＩ、宜ＪｌＩ、旬邑三大　蒸发仪浓缩至２　ｍｌ，用正己烷定容至５　ｍｌ后，待测。　该前处理方法对苹果样品中甲氰菊酯、联苯菊酯、氯　苹果产地的富士苹果样本中残留的拟除虫菊酯类农　氰菊酯、氯氟氰菊酯的检测回收率为８６．９％～　１０１．８％，变异系数≤８．８２％。　参考文献　［１］闫实，王立仁，张静，等．蔬菜中甲氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊　药进行测定，结果见表５。结果表明，在上述苹果样　品中仍存在以上几种农药，但均未超过国家对水果　类中有机氯农药、有机磷农药和拟除虫菊酯类农药　残留量的限量标准。　表５不同产区苹果中拟除虫菊酯类农药残留量　酯和三氟氯氰菊酯残留量测定方法的研究［Ｊ］．农业环境与发　展，２００３（５）：４３—４４．　［２］汤桦，孔祥虹，李建华，等．浓缩苹果汁中多种拟除虫菊酯类农　药残留量的气相色谱一质谱测定方法［Ｊ］．分析实验室，２００４，２３　（８）：２５—２７．　［３］李金培．大口径毛细管柱气相色谱测定烟草中６种拟除虫菊酯　农药残留量［Ｊ］．分析化学，２００１，２９（７）：７９３—７９５．　注：ＮＤ为未检出。　［４］丁慧瑛，鲍晓霞，郑自强．茶叶中７种拟除虫菊酯农药残留量的　检测方法［Ｊ］．分析测试学报，２０００，１９（６）：３ｌ一３５．　３结论　［５］朱鲁生，高兴文，崔风云．甲氰菊酯在苹果中残留研究［Ｊ］．山东　农业大学学报，１９９５，２６（２）：２０５—２１０．　建立了苹果中拟除虫菊酯类残留农药的测定方　（上接第２４７页）　发，２０００（３）：ｌ７一ｌ９．　钠。本研究为绿茶复合保健饮料新产品的开发提供　了可靠的技术支撑，也为银耳、百合等其他保健食品　［７］肖玫，刘晓明．芦蒿一菠萝香型饮料的工艺研究［Ｊ］．食品科　技，２００６（１０）：１９２—１９５．　［８］肖玫．仙人掌一菠萝香型饮料的工艺研究［Ｊ］．食品科学，　２００５（１２）：２６４—２６９．　的深加工　参考文献　探索出一条新路。　［９］肖玫、蕺菜的矿物元素新法测定及其饮料的工艺研究［Ｊ］．食　品科学，２００３（３）：７３—７６．　［１］方元超，赵晋府．茶饮料的生产技术［Ｍ］．北京：中国轻工业出　版社，２００１．　［１０］肖玫．菊花叶的矿物元素及其饮料配方的研究［Ｊ］．农业工　程学报，２００２（６）：１５１—１５４．　［２］刘永乐，蔡霄英，蒋雪薇．双花茶饮料的生产工艺［Ｊ］．食品工业　科技，２００３（３）：６５—６６．　［３］王庆兰，张学仁．枸杞子抗肿瘤作用研究综述［Ｊ］．时珍国医国　药，２０００，１１（６）：２６—２８．　［４］钱彦丛，宇文萍．枸杞子的化学成分及药理研究新进展［Ｊ］．中　医药学报，２０００，２８（４）：３３—３５．　［５］王向明．莲子小档案［Ｊ］．饮食科学，２００５（６）：２８．　［１１］肖玫．芦荟汁天然饮料工艺的研究［Ｊ］．食品科学，２００５（１）：　２７ｌ一２７４．　［１２］文良娟．龙眼肉果汁饮料的研制［Ｊ］．食品科技，２００２（５）：５５—　５６．　［１３］盖钧镒．试验统计方法［Ｍ］．北京：农业出版社，１９９９．　［１４］肖　玫．马齿菜矿物元素的测定及其开发利用［Ｊ］．食品工业　科技，２００４（６）：１３１—１３４．　［６］郭胜伟．芦荟乙醇提取液脱苦脱涩方法研究［Ｊ］．食品研究与开