2．乙醇沉淀DNA的原理是 。乙醇使DNA分子脱水
3．在DNA分离过程中造成DNA分子断裂的因素主要有 、
和 。核酸酶降解，化学降解，物理剪切
4.基因工程是在上世纪 年代发展起来的遗传学的一个分支学科。Cohen等在 年构建了第一个有功能的重组DNA分子。
碱法分离质粒DNA时，溶液Ⅰ的作用是 ，溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的作用分别是使DNA 。悬浮菌体，变性和复性。
5．通常可在三种温度下保存DNA：4~5℃、-20℃、-70℃，其中以 最好。-70℃
1．关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确？（ d ） （a） 溶液Ⅰ的作用是悬浮菌体 （b） 溶液Ⅱ的作用是使DNA变性
（c） 溶液Ⅲ的作用是使DNA复性
（d） 质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性 2．同一种质粒DNA，电泳时，三种不同形式的迁移速度是（ a ） （a） SC DNA＞L DNA＞OC DNA （b） SC DNA＞OC DNA＞L DNA （c） OC DNA＞SC DNA＞L DNA （d） L DNA＞SC DNA＞OC DNA 3．用碱法分离质粒DNA时，因为（ c ）所以可以被除去 （a） 染色体DNA断成了碎片
（b） 染色体DNA分子量大，而不能释放 （c） 染色体DNA变性后来不及复性 （d） 染色体末同蛋白质分开而沉淀 4.1953年Watson和Crick提出：（ a ）
（a） 多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋 （b） 三个连续的核苷酸代表一个遗传密码 （c） 遗传物质通常是DNA而非RNA
（d） 分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变
1．外源基因（或DNA片段）插入到某一基因内的位点后，这个基因不再有任何功能。（×）
1． PCR扩增的基本原理是什么？用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样信息？ PCR反应是在模板DNA、引物和dNTPs存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应，它根据DNA半保留复制的原理，在体外模仿细胞内DNA复制的过程，首先使模板DNA变性，两条链解开，然后使引物与模板退火，二者碱基配对，DNA聚合酶随即以四种dNTP为底物，在引物的引导下合成与模板互补的DNA新链。
进行PCR扩增，应对目的基因片段两侧的序列了解清楚，至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。
2． 在DNA分离过程中，为何常常酚∶氯仿联用？
酚与水有一定程度的互溶，单独用酚抽提DNA不能完全除去酚，而残留的酚抑制限制性内切酶和连接酶活性，甚至导致酶变性，而氯仿也是蛋白变性剂，它不与水互溶，而与苯酚
互溶，故可带去残留酚。
4.用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样信息？引物设计的一般原则有哪些？
进行PCR扩增，应对目的基因片段两侧的序列了解清楚，至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。引物设计的一般原则：
a.长度15～30bp，Tm接近72 ℃。
b.G+C占50%～60%，避免单一碱基的连续排列，一般两端G+C含量近似。 c.引物3’端必须与模板DNA互补。
d.一对引物间不能有4个以上的碱基互补。 e.引物本身应避免有回文序列。
5. 为什么氧化变色的酚不能直接用于DNA的分离？应如何处置？
苯酚呈酸性，易氧化产生自由基，直接用于DNA的分离，能够引起磷酸二脂键断裂，造成DNA降解，故氧化的酚需经重蒸除去氧化物，然后用Tris-Hcl饱和，调pH至中性使用。饱和酚可防止酚吸收更多DNA溶液，以降低DNA损失率。
6. 分离DNA时，为什么要在缓冲液中加入一定浓度的EDTA和蔗糖？
2+
（1）EDTA是螯合剂，可同Mg离子螯合，使核酸酶失去了作用的辅助因子，而抑制核酸酶的活性；（2）蔗糖可增加缓冲液的黏度，保护DNA不易断裂。 7. 抽提DNA去除蛋白质时，怎样使用酚与氯仿较好？
酚与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性。经过离心，变性蛋白质的密度比水的密度大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。而酚与氯仿有机溶剂的比重更大，保留在最下层。
作为表面变性的酚与氯仿，在去除蛋白质的作用中，各有利弊，酚的变性作用大，但酚与水相有一定程度的互溶，大约10%～15%的水溶解在酚相中，因而损失了这部分水相中的DNA，且单独用酚抽提DNA不能完全除去酚，而残留的酚抑制限制性内切酶和连接酶活性，甚至导致酶变性，而氯仿也是蛋白变性剂，变性作用虽不如酚效果好，但它不与水互溶，不会带走DNA，而与苯酚互溶，故可带去残留酚。所以在抽体过程中，混合使用酚与氯仿效果最好。
8. 为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊醇？
在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈震荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。一般采用氯仿与异戊醇为24：1之比。也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25：24：1，同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。
9. 提取DNA时为何使用无水乙醇沉淀DNA？
这是实验室最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以以任意比例和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。
10. 为什么苯酚要重蒸饱和后才能用于DNA的分离？氧化后如何处理？
苯酚呈酸性，易氧化产生自由基，引起磷酸二脂键断裂，故重蒸除去氧化物，然后用Tris-Hcl饱和酚，调pH至中性。饱和酚可防止酚吸收更多DNA溶液，以降低DNA损失率。氧化的酚可经重蒸后使用。
11. 为什么要用pH8的Tris水溶液饱和酚？呈粉红色的酚可否使用？如何保存酚不被空气
氧化？
因为酚与水有一定的互溶，苯酚用水饱和的目的是使其抽提DNA过程中，不致吸收样品中含有DNA的水分，减少DNA的损失。用Tris调节至pH为8是因为DNA在此条件下比较稳定。在中性或碱性条件下（pH5～7），RNA比DNA更容易游离到水相，所以可获得RNA含量较少的DNA样品。
保存在冰箱中的酚，容易被空气氧化而变成粉红色，这样的酚容易降解DNA，一般不可以使用。为了防止酚的氧化，可加入巯基乙醇或8-羟基喹啉至终浓度为0.1%。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉末，不仅能抗氧化，并在一定程度上能抑制DNase的活性，它是金属离子的弱螯合剂。用Tris pH8.0水溶液饱和后的酚，应分装在棕色试剂瓶里，上面盖一层Tris水溶液或TE缓冲液，隔绝空气，也可充入氮气，防止与空气接触而被氧化。平时保存在4℃或-20℃冰箱中，使用时，打开盖子吸取后应迅速加盖，防止氧化。 12. 从细胞中分离DNA时为何往往会断裂？
因为（1）细胞内存在很高的核酸酶活性，DNA裸露后，易降解；（2）酸碱化学试剂也会使DNA断裂；（3）多次离心、吸取、转移等，产生的机械张力剪切会使DNA断裂。
1. 制备的DNA在什么溶液中较稳定?
2. 为了保证植物DNA的完整性，在吸取样品、抽提过程中应注意什么？ 3. 核酸提取的原理 4. DNA提取的常用方法 5. RNA的主要分子类型
6. RNA提取过程中如何防止RNA酶的污染？ 7. 核酸的浓度和纯度如何确定？ 8. 电泳及电泳的原理
9. 琼脂糖凝胶电泳的优点及缺点？
10. 电泳常用的指示剂有哪些？作用原理？ 11. 聚丙烯酰胺凝胶电泳的优缺点 1．制备的DNA 在：（1）含有螯和剂如EDTA 中较稳定，因为EDTA 能螯和Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase；（2）在pH5～9 之间较稳定，否则过酸过碱会破坏DNA 的结构；（3）有一定离子强度（强度越高, DNA 越稳定）的溶液中较稳定。（TE 满足以上要求, 但如需对所得DNA 进行酶切, EDTA 浓度不可过高, 一般用0.1×TE 或0.2×TE）。
2． 为了保证植物DNA 的完整性：（1）整个提取过程应在较低温度下进行（一般利用液氮或冰浴）；这样可防止和抑制内源DNase 对DNA 的降解；（2）当DNA 处于溶解状态时，要尽量减弱溶液的涡旋，动作要轻柔；在进行DNA 溶液转移时用大口（或剪口）吸管，尽量减少对溶液中DNA 的机械剪切破坏。 1、PCR反应体系包含哪些成分？ 2、PCR的反应步骤？ 3、PCR的反应原理？
4、引物设计的原则？引物的延伸方向？ 5、影响PCR的因素？
1. 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（ b ）不太恰当。 （a）由作用于同一DNA序列的两种酶构成
（b）这一系统中的核酸酶都是Ⅱ型限制性内切核酸酶
（c）这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 （d）不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统
2. 限制性内切核酸酶可以特异性地识别和切割（ b ）。
（a）双链DNA的特异碱基对 （b）双链DNA的特异碱基序列 （c）特定的三联密码 （d）以上都正确 3. 限制性内切核酸酶的星号活性是指（ a ）。
（a）在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性 （b）活性大大提高
（c）切割速度大大加快 （d）识别序列与原来的完全不同
4.下列限制性内切核酸酶中，选用（ b ）时要考虑连接后外源DNA的插入方向。 （a）EcoRⅠ （b）EcoRⅡ （c）BamHⅠ （d）PstⅠ 5. DNA连接酶的主要作用是在DNA复制、修复中封闭缺口，（ a ）。 （a） 将双链DNA中的5′-P同3′-OH末端重新形成磷酸二脂键 （b） 作用时不消耗能量 （c） 需要Mn2+等二价辅助离子 （d） 也可以连接RNA分子 1. 限制性内切酶的命名原则？
2. 限制性内切酶的酶切产物有三种类型： 5’-端突出；3’端突出；平末端。 3. 什么是限制现象？粘性末端？同裂酶？同尾酶？ 星活性？ 4. 影响限制性内切酶活性的因素？诱发星活性的因素？
1.限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的修饰和对自身DNA的限制实现的。（ √ ）
2.迄今发现的限制性内切核酸酶既能作用于双链DNA，又能作用于单链DNA。（ × ）
3.限制性内切核酸酶通常保存在50%浓度的甘油溶液中。（√ ）
4.在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他的限制酶就不能切割了。（× ）
1.基因工程中有哪3类主要类型的载体？ 2.质粒DNA在提取过程中，产生3种不同的构型，它们在电泳时泳动速度有何不同？
3.理想的质粒载体应具备哪几个条件？
4.你对天然质粒pSC101和ColE1有哪些了解？
5.pBR322和pUC系列载体的特点？它们的复制子，抗性基因来自哪里？ 6.λ噬菌体载体的优点与不足？ 7.黏粒载体的特点？
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