昆明市山茶炭疽病菌生物学特性研究

・２６・　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｐｅｓｔ　ａｎｄ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｍａｒ．　２０１７　Ｎｏ．２　昆明市山茶炭疽病菌生物学特性研究　韩长志，赵惠谊　（西南林业大学林学院，云南省森林灾害预警与控制重点实验室，云南昆明６５０２２４）　摘要：对山荼炭疽病茵Ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｕｍ　ｔｈｅａｅ－ｓｉｎｅｎｓｉｓ　Ｍｉｙａｋａ生物学特性进行研究。该病菌最适生长　条件为ＰＤＡ、２８　ｏＣ、ｐＨ７；能在多种碳源和氮源条件下生长，碳源以可溶性淀粉最适，氮源以蛋白胨　最适。　关键词：茶炭疽盘长孢茵；山茶炭疽病；生物学特性；昆明市　中图分类号：￥７６３．１５文献标志码：Ａ文章编号：１６７１—０８８６（２０１７）０２—００２６—０３　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｏｆ　Ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｕｍ　ｔｈｅａｅ－ｓｉｎｅｎｓ￣ｉｎ　Ｃａｍｅｌｌｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ／ＨＡＮ　Ｃｈａｎｇｚｈｉ，ｅｔ　ａ１．（Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｄｉｓａｓｔｅｒ　Ｗａｒｎｉｎｇ　ａｎｄ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｙｕｎｎａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ；Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　６５０２２４，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｕｍ　ｔｈｅａｅ—ｓｉｎｅｎｓｉｓ，ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｏｆ　ｃａｍｅｌｌｉａ　ａｎｔｈｒａｃｎｏｓｅ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｗａｓ　ＰＤＡ　ｍｅｄｉａ，２８℃，ｐＨ　７，ｗｉｈｔ　ｃａｒｂｏｎ　ｓｏｕｒｃｅ　ａｓ　ｓｏｌｕｂｌｅ　ｓｔｒａｃｈ，ｎｉｒｔｏｇｅｎ　ｓｏｕｒｃｅ　ａｓ　ｐｅｐｔｏｎｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｕｍ　ｔｈｅａｅ－ｓｉｎｅｎｓｉｓ；ｃａｍｅｌｌｉａ　ａｎｔｈｒａｃｎｏｓｅ；ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ；Ｋｕｎｍｉｎｇ　ｃｉｔｙ　炭疽病是山茶Ｃａｍｅｌｌｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｌ．上最常见　云南省森林灾害预警与控制重点实验室，菌种编号　和发生最为严重的病害之一，不仅为害其幼嫩叶片　ＳＣＣＧ一１。　和枝梢，而且还可以危害老叶，受害植株出现落叶、　１．２病原菌生物学特性研究　生物学特性的研究　落蕾、落花以及枝条枯死等现象，严重降低了山茶的　选择常规培养基ＰＤＡ进行病菌培养。即，用直径　观赏价值。云南山茶原产云南，作为昆明市的市花，　７　ｍｌＴｌ的打孔器将ＰＤＡ培养基上培养７　ｄ（２８℃恒　具有较高的观赏价值。２０１４年７＿８月，调查昆明　温培养箱、黑暗条件）的病原菌菌落打成菌丝块接　市昙华寺公园内植物病害的发生情况，发现山茶炭　种ＰＤＡ培养基上（不同的培养基、碳源和氮源测试　疽病的发病率高达９６．８％、病情指数为３Ｏ．２０，对其　分别见１．２．１，１．２．５，１．２．６），２８℃恒温培养（不同　病原菌分离鉴定，确定是由茶炭疽盘长孢Ｇｌｏｅｏｓｐｏ．　温度测试除外），每种处理５个重复，培养５　ｄ。观　ｒｉｕｍ　ｔｈｅａｅ—ｓｉｎｅｎｓｉｓ　Ｔ．Ｍｉｙａｋｅ引起…ｏ学术界多从　察和描述病菌的菌落特征，用十字交叉法测量菌落　发病因素　Ｉ３』、防治方法　等方面开展山茶炭疽　直径，统计分析病原菌生长差异。　病的研究，也有学者对采自浙江金华职业技术学院　１．２．１　不同培养基对病原菌菌丝生长的影响　选　引起该病的病原菌进行了生物学特性研究　Ｊ。鉴　择５种培养基做比较。　于炭疽病菌在不同地区具有小种分化等特性　，有　①马铃薯葡萄糖培养基（ＰＤＡ）：马铃薯２００　ｇ、　必要对引起云南山茶炭疽病的病菌开展生物学特性　葡萄糖２０　ｇ、琼脂粉２０　ｇ、水１０００　ｍＬ；②马铃薯蔗　研究，因此，作者对前期所获得的山茶炭疽病菌的生　物学特性进行试验，以期为进一步开展该病菌遗传　收稿日期：２０１５—１０—２７　基金项目：国家自然科学基金项目（３１５６０２１１），云南省优势特色重　关系以及防治该病提供重要的理论支撑。　点学科生物学一级学科建设项目（５００９７５０５），云南省高　校林下生物资源保护及利用科技创新团队（２０１４０１５），云　１材料和方法　南省森林灾害预警与控制重点实验室开放基金项目　（ＺＫｌ５０ｏｏ４），云南省教育厅科学研究基金项目　１．１　菌种山茶炭疽病菌（茶炭疽盘长孢）分离于　（２０１４Ｙ３３０）　昆明市昙花寺公园的山茶叶片，将获得的纯培养菌　作者简介：韩长志（１９８１一），男，博士，讲师，河北省石家庄人，从事　株保存在试管斜面，４℃冰箱中保存。菌种保藏于　经济林木病害生物防治与真菌分子生物学的科研工作，　Ｅ—ｍａｉｌ：ｈａｎｃｈａｎｇｚｈｉ２０１０＠１６３．ｃｏｒｎ。　中国森林病虫２０１７年３月　第３６卷第２期　２　０　・２７・　８　６　４　２　０糖培养基（ＰＳＡ）：马铃薯２００　ｇ、蔗糖２０　ｇ、琼脂粉　碳的葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、可溶性淀粉等多种　２０　ｇ、水１０００　ｍＬ；③燕麦培养基（ＯＡ）：燕麦片　碳源代替查氏培养基中蔗糖，做成不同碳源的固体　３０　ｇ、琼脂粉２Ｏ　ｇ、水１０００　ｍＬ；④清水洋菜培养基　培养基。　（ＷＡ）：琼脂粉２Ｏ　ｇ、水１０００　ｍＬ；⑤玉米粉培养基　１．２．６不同氮源对病原菌菌丝生长的影响　以查　（ＣＭＡ）：玉米粉４０　ｇ、蔗糖１Ｏ　ｇ、琼脂粉２０　ｇ、水　氏培养基为基础，以不加氮源为对照，用含有相当量　１０００　ｍＬ。　氮的硝酸铵、磷酸二氢铵、牛肉膏、蛋白胨、甘氨酸等　１．２．２不同温度对病原菌菌丝生长的影响　将病　多种氮源代替查氏培养基中的硝酸钠，做成不同氮　原菌分别置于５，１１，２０，２５，２８，３７℃的恒温培养箱　源的固体培养基。　中培养。　１．３数据统计与分析用Ｅｘｃｅｌ　２ｏｏ７对原始数据　１．２．３不同ｐＨ值对病原菌菌丝生长的影响　在　进行分析、处理和作图。所有图形中的正负偏差均　无菌条件下用１　ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ溶液和１　ｍｏｌ／Ｌ的　表示标准误（ＳＥ），利用Ｅｘｃｅｌ中的程序ＳＥ＝　盐酸溶液调节灭菌的ＰＤＡ培养基ｐＨ值，设ｐＨ值　ＳＴＤＥＶ（ｒａｎｇｅ　ｏｆ　ｖａｌｕｅｓ）／ＳＱＲＴ（ｎｕｍｂｅｒ）计算。　为３，４，５，６，７，８，９，１０，ｌ１等９个梯度。　１．２．４不同密封条件对病原菌菌丝生长的影响　２结果与分析　采用培养皿Ｐａｒａｉｆｌｍ胶带封口和不封口两种方法。　２．１　不同培养基对病原菌菌丝生长的影响　山茶　—日　旦薅　１．２．５不同碳源对病原菌菌丝生长的影响　以查　炭疽病菌在ＰＤＡ上生长速度最快，且菌丝最密集；４　２　Ｏ　　８　氏培养基为基础，以不加碳源为对照，用含有相当量　其次为ＰＳＡ、ＣＭＡ、ＷＡ以及ＯＡ（表１、图１）。　表１　不同培养基对山茶炭疽病菌菌丝生长的影响　注：“＋”一般Ｉ‘‘＋＋”密；“＋＋＋”较密；“＋＋＋＋”紧密。　生长速率最大，其次为ｐＨ　６，８（图３）。　富　旦　瑙　酬　ＰＤＡ　ＰＳＡ　ＣＭＡ　ＷＡ　ＯＡ　培养基类型　图１　不同培养基上病原菌生长对比　２０　２５　２８　２．２不同温度对病原菌生长的影响　在２Ｏ，２５，　温度，℃　２８℃条件下，山茶炭疽病菌能正常生长，以２８℃时　圈２不同温度对病原菌生长速率的影响　菌丝生长速率最大（图２），而在５，１１，３７　ｏＣ条件下，　病原菌不能生长。将此３种温度下培养的病原菌转　移至２８℃条件下继续培养后，菌丝又能恢复生长，　该现象表明山茶炭疽病菌可以暂时忍受５，１１℃的　低温以及３７℃的高温，待外界环境条件恢复后依然　可以正常生长。　２．３不同ｐＨ对病原菌菌丝生长的影响　以ＰＤＡ　４　５　６　７　８　９　１０　为基础培养基，ｐＨ３条件下山茶炭疽病菌不能生长，　ｐＨ　ｐＨ４～１０时病原菌均能生长，尤以ｐＨ为７时菌丝　圈３不同ｐＨ培养基上病原菌生长速率　６　・２８・　—ｑ、ｇ旦、Ｆｏｒｅｓｔ　Ｐｅｓｔ　ａｎｄ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｍａｒ．　瓣瑙　酬　２０１７　Ｎｏ．２　２　０　８　６　４　２　Ｏ　２．４不同密封条件对病原菌的生长影响　使用　ｐａｒａｆｉｌｍ封口膜对培养皿封口条件下，山茶炭疽病　菌的生长较不封口好、生长速度更快，平均生长速率　为ｌＯ．４４　ｍｍ／ｄ。这个结果表明，不通气条件更加适　宜山茶炭疽病菌的生长。　２．５不同碳源对病原菌菌丝生长的影响　山茶炭　疽病菌在６种供试碳源的培养基上均能快速生长，　尤以可溶性淀粉作为碳源的条件下生长最快，其次　是葡萄糖；值得关注的是，在不加碳源的对照培养基　上，尽管该菌菌丝生长速率与添加乳糖、果糖等碳源　的培养基的生长速率差别不大，但其所形成的菌落　较为稀疏、菌丝颜色较浅（图４）。　一ｐ，ｇｇ一薅幽　２　０　８　６　４　２　０　枣　‘　图４不同碳源对病原菌生长速率的影响　２．６不同氮源对病原菌菌丝生长的影响　山茶炭　疽病菌在不同的氮源培养基上生长速率不尽相同，　在６种所供试的氮源培养基上，蛋白胨作为氮源的　培养基上病原菌生长最快，且菌丝白色、密集，菌落　较厚；其次是甘氨酸和酵母膏；硫酸铵和磷酸二氢铵　作为氮源不适宜该病原菌生长，出现抑制生长现象　（图５）。与缺乏碳源相似，病原菌在缺乏氮源的培　养基上所形成的菌落稀疏，颜色也较浅。　３结论与讨论　本研究从不同培养基、温度、ｐＨ、密封情况、碳　源以及氮源等方面对山茶炭疽病菌的菌丝生长影响　进行了研究，明确该病原菌生长适宜温度为２８℃，　温度低至５℃或达到３７℃时不能生长；最适ｐＨ为　７，适合较宽的酸碱度范围；密封有利于该病原菌生　氮源　图５不同氮源对病原酉生长速翠的影晌　长；能在多种碳源和氮源情况下生长，碳源以可溶性　淀粉最适，氮源以蛋白胨最适。该结果除温度与前　人研究结果较相似外　Ｊ，其他指标均具有较大的差　异性，即菌丝生长的最适温度为２５—３０℃，最适ｐＨ　为５—６，最适碳源则为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖。　上述研究结果为进一步开展山茶炭疽病菌的致　病基因功能研究提供了重要的培养条件，也为该病　菌可危害多种植物提供了重要的理论解释。尽管如　此，尚缺乏开展上述不同条件对山茶炭疽病菌孢子　的影响情况分析，有待于今后进一步开展相关研究。　参考文献：　［１］韩长志，赵惠谊．昆明市山茶炭疽病病原菌鉴定初报［Ｊ］．中　国森林病虫，２０１６，３５（５）：５—６．　［２］何美仙，罗军，贾春蕾，等．山茶炭疽病发病的影响因素研究　［Ｊ］．林业实用技术，２００６（１２）：２２—２３．　［３］何美仙，罗军，贾春蕾，等．山茶炭疽病发病因素的研究［Ｊ］．　安徽农学通报，２００６（１０）：１３７—１３８．　［４］李景蕻．山茶炭疽病的发生和防治［Ｊ］．农村实用技术，２００４，　（１）：２１．　［５］赵东，徐进才．山茶炭疽病发生及防治技术［Ｊ］．安徽农业，　２００３（６）：２４．　［６］　何美仙．山茶炭疽病菌生物学特性研究［Ｊ］．浙江农业科学，　２００５（４）：３１６—３１８．　［７］　韩长志．炭疽菌属真菌分类研究现状及发展趋势［Ｊ］．中国植　保导刊，２０１５（６）：２４—３０．　（责任编辑杨静莉）