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中药经验方治疗溃疡性结肠炎不同时期TNF-α及IL-23的变化

2023-01-22 来源:榕意旅游网
·76· WORLD CHINESE MEDICINE January 2018,Vo1.13,No.1 中药经验 方治疗溃 疡性结肠炎不同时期TNF一 及IL一23的变化 司海鹏 朱长乐 秦菲 叶 柏 (1南京中医药大学附属医院病理科,南京,210029;2江苏省中西医结合医院,南京,210028 3南京中医药大学附属医院消化科,南京,210029) 摘要 目的:探讨溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)患者在中药经验方治疗不同时期TNF—Ot及IL 23的变化。方法:选 取2011年4月至2014年8月在南京中医药大学附属医院经中医辨证后诊断为UC的患者26例,作为观察组,取健康志 愿者26例作为正常对照。观察组给予中药经验方治疗,分别在疾病活动期和缓解期内镜下取活检,用免疫组化方法检测 组织中TNF一 及II 一23表达。结果:各组TNF—d及IL一23表达显示,UC活动期与缓解期组比较,及UC活动期与正常组比 较,差异有统计学意义(P<0.05),而UC缓解期与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:经验方可以降低溃 疡性结肠炎患者活动期组织中细胞因子水平,从而抑制其对黏膜的损伤。 关键词溃疡性结肠炎;IL一23;TNF—d;免疫组化 Changes of IL一23 and TNF-10t in Different Stages of Ulcerative Colitis Treated by Chinese Materia Medica Empirical Formula Si Haipeng。,Zhu Changle ,Qin Fei ,Ye Bai (1 Department ofPathology,Afifliated Hospital ofNanifng University f oTCM,Naajing 210029,China;2 Jiangsu Province Hospital on Integration f oChinese and Western Medicine,Nanjing 210028,China;3 Department of Gastroenterology, AfilfiatedHospital ofNanifng UniversityofTCM, ng 210029,China) Abstract Objective:To explore the changes of IL-23 and TNF一0L in different stages of the patients with ulcerative colitis(UC) treated with Chinese materia medica empirical formula.Methods:A total of 26 patients who were diagnosed as UC through TCM syndrome differentiation in Afilfiated Hospital of Nanjing University of TCM from April 201 1 to August 2014,were treated with Chinese materia medica empirical formula.Biopsy was performed during active stage and remission stage.The expression of IL一23 and TNF—Ct in the intestinal mueosa in different stages were assessed by immunohistochemistry(IHC).Another 26 healthy volun— teers were selected as contro1.Results:The expression levels of IL一23 and TNF—cdn active stage were higher than those of the con— tro]group and those in remission stage with statistically signiifcant differences(P<0.05).There was no statistically signiifcant difference in UC remission stage when compared with control group.Conclusion:Chinese materia medica empirical formula could reduce the inflammatory reaction of UC patients in active stage.SO as t()inhibit damage to intestinal mucosa. Key Words Ulcerative colitis;IL一23;TNF一 ;Immunohistochemistry 中图分类号:R285.6 文献标识码:A doi:10.3969/j.issn.1673—7202.2018.01.018 溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)是肠道慢 法治疗UC患者,观察活动期及缓解期组织中TNF一仅 性非特异性疾病,病因未明,目前认为其发病机制与 及IL一23的变化。 黏膜缺损、肠道感染、免疫调节异常等多种因素有 1资料与方法 关¨ 。病变主要在结肠黏膜及黏膜下层,一般从结 1.1一般资料 选取201 1年4月至2014年8月 肠远段开始,向上累及全结肠甚至末段回肠,病变呈 在南京中医药大学附属医院经中医辨证后诊断为 连续性,患者主要以腹痛、腹泻和黏液脓血便为表 UC的患者26例,作为观察组,取健康志愿者26例 现,属中医“疾痢”“便血”范畴。在前期血清细胞因 作为正常对照。观察组中,男11例,女15例,年龄 子研究基础上 。J,我们此次采用中药口服及灌肠方 16~63岁,病程3~24个月。对照组中男11例,女 基金项目:国家自然科学基金青年项目(81403344)——“黄芩苷干预PI3K/AK_r/NF.KB信号通路对溃疡性结肠炎免疫调节、肠黏膜屏障修 复的作用机制研究”;国家中医药行业科研专项资助(201407001)——“针对难治性脾胃病的中医药诊疗规范转化应用研究” 作者简介:司海鹏(1976.08一),女,硕士,副主任NN,研究方向:肿瘤病理研究,E-mail:mtshp@sina.corn 通信作者:叶柏(1961.O4一),男,博士,主任医师,硕士研究生导师,研究方向:脾胃病,E—mail:mtshp@sina.COl ̄l 1I1:外,Il 药201 8年1』j第1 3巷 1期 l5例,年龄27~65岁 煨木香6 g、肉厦毯5 g,l ̄lJ/d,分2次服用,用药 1.2诊断标准西医诊断标准清参照2007年l11华 I~2个川,Hr依病情变化随证加减。 1.7观察指标 分别在疾病活动期和缓解期内镜 下收活柃,10%甲 同定,石蜡包埋切片进行病理常 规苏水精一伊红(Hematoxylin—Eosin,HE)染色;同时 片进行SP二步法免疫组化染色,IL-23及TNF—ol 试剂均购自福州迈新公二J。 医学会消化病学分会发表的“对我国炎症性肠病诊 断治疗规范的共识意见”进行诊断 ;而中医参照 《中药新药临床研究指导原则》为辨证标准 1.2.1 活动期主症腹痛、腹泻,黏液脓血便;舌质 红,苔黄腻。次症:身热、小便短赤;肛门灼热;里急 后重;口干口苦口臭;脉滑数。,符合主症加次症2项 即可诊断。 1.7.1 HE染色观察腺体形态改变,隐窝脓肿有 尢,问质炎细胞浸润情况。l 1.7。2 免疫组化染色 计数高倍镜下5个视野内 『5fI性细胞,II 。23及TNF. 染色结果参照文献进行, 均为胞质染色,按染色强度及数量分为3级:无染色 为(一);(+)为阳性细胞数<10%且强度为淡黄 1.2.2缓解期主症 大便溏薄,黏液门多赤少;舌 质暗红,苔白腻。次症:腹痛隐隐;神疲乏力;食欲减 退;口于苦;脉细数。符合主症加次症4项即可诊 断。 1.3纳人标准患者知情同意。 符合西医诊断标准;符合中医辨证 色;(+++)为阳性细胞数>50%,染为棕黄色;二 行之问为(++)。将对应分级记为0、l、2、3。采用 舣旨法,ih 2位病理医师分别判渎取平均数。 标准,活动期为大肠 热证,缓解期为脾。肾阳虚证;  不符合中西医溃疡性结肠炎诊断 1.8疗效判定标准1)病理检查示:炎细胞减少,2)隐窝脓肿消失,隐窝排列 标准;妊娠或哺乳期女性;合并肝。肾等其他系统严重 尼其是中性粒细胞消失;1.4排除标准原发性疾病及精神病者;同时参加其他临床实验研 紊乱;3)潘氏细胞化生。 究的患者 1.9统汁学方法 采用sl ss 10.0统计软件对数 病历资料不全或中途退出 进行统汁学分析,多个样本比较进行x 检验,以 P<0.05为苊异钉统计学意义。 2 结果 1.5脱落或剔除标准者。 1.6治疗方法 1.6.1 活动期 中药口服基本方:发作期患者体内 2.1 HE染色活动期可见吲有层内弥漫浸润的急 久蕴湿热之毒,毒邪再加上饮食积滞,使得肠中气滞 慢性炎细胞;可见隐窝炎及隐窝脓肿;黏膜表面糜 血瘀,从而引发肠络血败继之肉腐,成痈酿脓,m络 烂、溃疡形成;部分上皮内杯状细胞减少。缓解期可 受损,混杂粪便而下故临床表现为黏液脓血便,此种 大肠湿热证根据我院叶柏主任医师多年经验用 各种炎细胞明显减少;隐窝脓肿虽然消失,但是隐 窝呈不规则增生,排列较紊乱;部分可见潘氏细胞化 !J!lJ 如图l、2、3。 药 ,应予凉血活 、清化敛疡法:赤芍15 g、白芍 牛 正常组问质散在少量炎细胞,腺体大小、形态规 l5 g、地锦l5 g、紫草15 g、秦皮15 g、地榆15 g、炒当 归10 g、白头翁10 g、黄芩10 g、葛根10 g、煨木香 6 g、自蔹10 g、牡丹皮10 g、肉桂2 g、黄连3 g、生甘 草5 g。1 ̄lJ/ct,分2次服用,用药1~2个月,可根据 病情变化随证加减巾药灌肠方:地榆30 g、石菖蒲 20 g、黄柏20 g、白头翁15 g、(包)五倍子10 g、白及 粉3 g、三L粉1.5 g、青黛3 g,浓煎l00~150 ml ,力【1 入锡类散1 g。患者排便后左侧卧他,缓慢注入药 液临睡前灌肠,1次/d,每连续灌肠20 d后停灌 7(I 图1 u( 活动期多量急慢性炎图2 tiC缓解期间质各种炎 细胞浸润( 染色x200倍)细胞减少(HE染色× )倍) 1.6.2缓解期 中药口服基本方:根据叶柏主任医 师多年经验用药,缓解期本虚为主,主要是脾肾阳 虚,应予清化活血、健脾温中法:云茯苓15 g、秦皮 15 g、地锦15 g、仙鹤草15 g、炒当归10 g、炙黄芪 15 g、益智仁10 g、防风10 g、炒白术10 g、黄连3 g、 图3正常黏膜HE染色X200 2.2 疫组化纳 UC缓解 与活动期组比较, 的5一氰 水十勿眩托锄1刹,它 仃抑制免疫功能的作 川, J术f 常川t作 选药, 址K 他用会给患 带 活缓 蚶 米一定 度的 良反应女¨ 心、 叶等 ’ 马米酸 :【 仃统 :意义( <0.05),UC缓解期 正常绀 比较, 异有统计学意义 比较lJJ rI‘高,始蚌有统计学意义(, <0.05),UC 活动!纠 Jj Jl!常 (P<0.05) , 4~6,表l~2。 常动三耋 【{I1荚 汀片址种新) 约,疗效 ,但 1人j研究较 = = = 0 0 0 少 ‘ 、m 近 年 lI。约独特的约胖作用,比 独心 JIj【JL『药 安全订效,所以我们此次采¨】I_ l1约治疗UC 心栉求探讨一I1药疗效、、 图4活动期炎细胞 一 图5缓解期炎细胞 4 4 II1 J llC J j:“肠Jxl’’‘‘泄 ”,痫十Jl特点活动期 8如 0 3 为体1人1 邪久蕴 热之毒邪JJlI I 饮食l干J{滞,使得肠 卜战I 衷脱为黏液脓m 0 0 0 rII 滞『『Il‘瘀,从 f』I发肠络 收继之肉腐,成痈酿 脓, 络受 ,龇杂粪 表达l1 ,23增多 lL一23表达降低 图6正常组炎细胞lI 一23明显降低 表f llf.患者 d、l1._23不同表达强度的病例数(例) FNF一“ 表2 患者TNr—d、II .23表达水平计分(分) T 一 I 2 3 :‘:._i 功i训比较, P<0 05: i{i'lf【比较,,J<0.05 3讨论 溃疡忡结肠炎,足一种发生枉肠道的非特异性 慢性疾 , 发痫机制 遗传易感宿主对肠道菌群 的免疫 答失常仃父,新近研究发现心里压力、饮川 ,卜奶 【,J 增JJll发痫概率 ,“推洲UC是遗传、环境、 免疫f¨感染等多种 素 同作用,引起肠道黏膜fIl 脱 i 疫反 致的 、过去西方 家巾u(: 常 ,f【l近 年随着旧人饮食习惯的变化,发痫率逐 步i 心 主要表现为腹痛、腹泻、 急后1蓖,还 『『f I” 仃结节性红斑、口腔溃疡等不同程度的肠 外表现”, 镜下则为弥漫性炎性反应为主的病理改 变 I t 对此痫的治疗原则是:控制病情的发作、缓 解 状 、减少许发症的发生 美沙拉嗪作为新 4 他,^£昔形成溃疡 、 UC的痫 ,5  8 9 镜_卜 以 行划肠黏脱允m、出I 、溃疡等痫 改变,我院叶柏 O 0 以多年治疗L J【:临眯经验 ,治疗I 以凉【m‘活 m、清化敛疡为基本治疗 法,含黄芩、0 3 地锦、O  根、 桀皮、亦门勺、战连、煨小香、炒 成的治疗UC ^ 活动 【lI约力_I 而埘缓斛驯IJ!IJ根据《索问·太 lI IO]沦》:“食饮 1,,起脯小时 , 受之 下为飧 泄,久为肠湃”,疾痫K期发f1 ,久m 拟1_’j_及肾,命门 火 ,脾火濉煦, 致肿肾子 虚,治疗f 以 茯 、条 皮、地锦、fIll鹤t’Ill=、炒当归、炙战必、防风、炒 术、黄 连、煨小爵等j 消化活InL、健脾 法为上,收刮小 锵的疗效 、经 的约 究 【JJ】:办芍除能抑制 小板聚集,降低个 黏度,还』I仃抗炎干¨免疫抑制作 川;l、I, !J{JJ能改薄局部徽循环,疏迎衄细胞瘀滞,蒯 1 机体免疫功能及杀闲作用;战迮则能抑制和调1 肠道闲群,、。1它 创 接触 ,可使局部 白质凝  I叫, 丧面肜成· 较敏密的你护 ,促进溃疡表面 的愈合 故此方 改善肠通局if/,;h ̄ 』1:,以及抗 感染、改藩机体免疫状态等 Jtf,特刖是通过改落 部 运,t 以促进炎性反心吸收、JJ}】速溃疡愈合,减 j= !状 促进炎 反 的 l'1,l7细胞.增吼受多种细胞 _J 影响. 抵抗痫 感染及介导f,1 免疫性疾 力‘ 起 作川 In¨l 一l7址 rhI7 Jj包的 效俺 r,研究发现l1 一l7 ¨:心 肠黏 ,『支m 达增l岛,推测 IIC的发 卜ffl发 ItI 币嘤 川 新近捉“ ,J I1,-23/Il 一l 7轴说lJfJ。‘:“lI 一23 仪能 促进Tl l7细胞扩增干lJ仔涌,还能分泌IL—l7,… 行 仃 大的刺激中性 细胞的功能,『{{此丧叫II 一23 UC发生发腱 tI发挥重 作川” rNF— 址}{j单 核/ 噬细胞活化产,l 的一种细胞 ,ii婪 肠黏 膜局部发挥作 ,迎过 特定受体结合J : 潜在的 细胞薄效心…币¨ 炎件反J、 作厂H ll 一23、 I、NF— 作 世界中医药2018年1月第13卷第1期 4l2. ·79· 为炎性反应递质,诱发UC肠黏膜的炎性反应,从而 出现相应的临床症状。本研究IL一23、TNF一 表达情 [8]陈璐,周中银.溃疡性结肠炎发病机制的研究进展[J].疑难病杂 志,2016,15(6):650 ̄54. 况,缓解期患者的细胞因子水平较活动期降低,差异 有统计学意义(P<0.叭),说明此经验方可以抑制 [9]Vinesh E,Masthan K,Kumar MS,et a1.A Clinicopathologic Study of Oral Changes in Gastroesophageal Reflux Disease,Gastritis,and Ulcer— 促炎因子的表达,使细胞因子水平下降,最终抑制了 炎性反应递质对肠黏膜的损伤,相应临床症状也随 之缓解,与有关结果一致 1 ”J。缓解期组与正常组 比较,没有统计学差异,但能看出缓解期能够减少炎 性反应递质,缓解黏膜损伤的趋势,效果较好。 ative Colitis[J].Journal of Contemporary Dental Practice,2016,1 7 (11):943. 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