人冠状动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶3与白细胞介素1β的相关性

中国组织工程研究与临床康复第１１卷　朋２００７－０４—０８出版　ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＲｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｖｅ　ＴｉｓｓｕｅＥｎｇｉｎｅｅｎｎｇＲｅｓｅａｒｃｈ　Ａｐｒｉｌ８，２００７　Ｖｏ／．１１，Ｎｏ．１４　。　彀等｜；　ｌ　ｌ＿　＿　ｌ　ｌｌｌ＿　｜　ｌ＿　｜　ｌ。一　ｌ　１人冠状动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶３与白细胞介素１　Ｉ３的　相关性★　张清华’，夏爱祥’，蒋知新　，黄平。，方效民’，王志津。，宋成运。，赵婷。　’Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｇｅｒｅｏｌｏｇｙ，　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－Ｉ　ｂｅｔａ　ａｎｄ　ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　３　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ａｒｔｅｒｉａｌ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌｌｓ　Ａｂｓｔｒａｃｔ　℃ｅｎｔｒａＩ　Ｌａｂｏｍｔｏ￣７．　３Ｓｉｘｔｈ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏＦ　ＩｎｔｅｒｎａＩ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．ｔｈｅ　３０５　ＨｏｓｐｉｌａＩ　ｏｆ　ＡⅡ　：Ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ．１　１３（ＩＬ．１　１３）　ａｎｄ　ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ・３（ＭＭＰ－３）　ｇｅｎｅ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ＰＬＡ．Ｂｅｌｌｉｎｇ　１０００１７．Ｃｈｉｎａ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ａｒｔｅｒｉａｌ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌｌｓ．　ＭＥＴＨＯＤＳ：Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＣｅｎｔｒａＩ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｓｅｎｉｌｅ　Ｄｉｓｅａｓｅ．３０５　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ＰＬＡ　ｆｒ０ｍ　Ｍａｖ　２００５　ｔｏ　Ａｕｇｕｓｔ　２００６．Ｈｕｍａｎ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ａｒｔｅｒｉａＩ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌｌｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｉｆｔｈ　ｔｏ　ｓｅｖｅｎｔｈ　ｐａｓｓａｇｅ　ｗｅｒｅ　ｓｅｅｄｅｄ　ｉｎ　２５　ｃｍ０　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｆｌａｓｋｓ　ａｔ　２．５ｘｌ００　ｃｅｌｌｓ／Ｌ．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗａｓ　ｃｈａｎｇｅｄ　２４　ｈｏｕｒｓ　Ｉａｔｅｒ．Ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｅｌｌｓ　ｒｅａｃｈｅｄ　８０％ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｅ．（￣ｔｈｅ　ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ　ａｎｄ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｏｃｌｌｅｃｔｅｄ　ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｉｎ　２０　ｐ，ｇ／Ｌ　ＩＬ－１　１３　ｆｏｒ　Ｏ，　２，４，８，２４　ａｎｄ　３６　ｈｏｕｍ；（　ｈｅ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ａｆｔｅｒ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｉｎ　ＩＬ．１　１３　ｏｆ　０，５，２０　ａｎｄ　４０　ｐ，ｇ／Ｌ　ｆｏｒ　６　ｈｏｕｒｓ．ＴｏｔａＩ　ＲＮＡ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃ【ｅｄ　ｆｒ０ｍ　ｔｈｅ　ｃｅｌｌｓ　ｗｉｔｈ　ＴＲＩｚｏＩ　Ｒｅａｇｅｎｔ．　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｔｙ　ｏｆ　ＲＮＡ　ｗｅｒｅ　ｄｅｆｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｖｉｏｌｅｔ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ．Ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　ＲＮＡ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｗｉｔｈ　１　２　ｇ／Ｌ　ｇｅｌａｔｉｎ　ｉｍａｇｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ．Ｒｅａｌ・ｔｉｍｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＰＣＲ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　Ｏｎ　ＲＮＡ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ＭＭＰ－３　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｃｅｌｌｓ．　ＲＥｓＵＬＴＳ：（￣Ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｔｙ　ｏｆ　ｔｏｔａＩ　ＲＮＡ：Ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　Ａ２６０　／４２加　ｏｆ　４　ｐ，Ｌ　ｓａｍｐｌｅ　ｄｉｌｕｔｅｄ　ｔｏ　４００　ｐ，Ｌ　ｗａｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　１．８　ａｎｄ　２．０．ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｕｒｉｔｙ　ｏｆ　ＲＮＡ　ｗａｓ　ｈｉｇｈ；ｔｈｅ　ｂａｎｄｓ　ｏｆ　１８　Ｓ　ａｎｄ　２８　Ｓ　ｗｅｒｅ　ｃｌｅａｄｙ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ａｔ　ｔｈｅ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｅｒｏｇｒａｍ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ｄｉｆｕｓｉｏｎ，ｉｎｄｉａｃｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　ＲＡＮ　ｗａｓ　ｂｅ￣ｅｒ．②Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔａｒｇｅｔ　ｇｅｎｅ：Ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｏｃｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＩＬ－１　１３，ｔｈｅ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｅｇａｎ　ｔｏ　ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅ　ａｔ　２　ｈｏｕｒ，ｗｈｉｃｈ　ｒｅａｃｈｅｄ　ｔｈｅ　ｐｅａｋ　ａｔ　８　ｈｏｕｒ，ｔｈｅｎ　ｂｅｇａｎ　ｔｏ　ｄｅｓｃｅｎｔ；ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｍｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＩＬ－１　１３．ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗａｓ　ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｄｏｓｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｏｆ　ＩＬ－１　１３　（ｒ＝０．９０４，Ｐ＝Ｏ．０００）．Ｔｈｅｒｅ　ｗｅｒｅ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｉｆａｃｎｔ　ｄｉｆｅｆｅｎｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　２０　ｐ，ｇ／Ｌ．ａｎｄ　４０　ｐ，ｇ／Ｌ　ＩＬ・１　１３（Ｐ　＝Ｏ．１　５４），ａｎｄ　ｔｈｅｒｅ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ　ａｍｏｎｇ　ｏｔｈｅｒ　ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜０．Ｏ５）．　Ｃ０ＮＣＬＵＳ１０Ｎ：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ　Ｉ　Ｌ．１　１３　ｃｏｕｌｄ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＭＭＰ．３　ａｓ　ｔｈｅ　ｓｔａｂｌｅ　ｍａｒｋｅｒ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ａｒｔｅｎａＩ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌｌｓ．　ａｎｄ　ｆｔ　ｍａｙ　ｂｅ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ｆｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　ｆｎ　ａｃｕｔｅ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ．　Ｚｈａｎｇ　ＱＨ，Ｘｉａ　ＡＸ，Ｊｉａｎｇ　ＺＸ．Ｈｕａｎｇ　Ｐ，Ｆａｎｇ　ＸＭ．Ｗａｎｇ　ＺＪ，Ｓｏｎｇ　ＣＹ。Ｚｈａｏ　Ｔ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ・１　ｂｅｔａ　ａｎｄ　ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　３　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ａｆｌｅｄａｌ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌｌｓ．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ　Ｚｕｚｈｉ　Ｇｏｎｇｃｈｅｎｇ　Ｙａｎｊｉｕ　ｙｕ　Ｌｉｎｃｈｕａｎｇ　Ｋａｎｇｆｕ　２００７；１　１　（１４）：２６１７・２６２０（Ｃｈｉｎａ）　［ｗｗｗ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍｌｚｇｌｃｋｆｌｅｊｏｕｍａｌｌｕｐｆｉｌｅｓｌＯ７－１４１１４ｋ－２６１７（ｐｓ）．ｐｄｆ］　摘要　目的　观察人冠状动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶３与炎症因子白细胞介素１１３的关系。　方法：实验于２ＯＯ５一Ｏ５，２０Ｏ６一Ｏ８在解放军第三。五医院老年病中心实验室完成。人冠状动脉平滑肌实验用５～７代的细胞，按　２．５ｘｌ０。Ｌ－１密度接种于２５　ｃｍ　的培养瓶中，２４　ｈ后换液，生长接近８Ｏ％融合时进行如下处理：①２０　ｐ，ｇ／Ｌ质量浓度白细胞介　素１１３培养０，２，４，８，２４，３６　ｈ后收集上清夜和细胞。②不同质量浓度（０，５，２０，４０　ｐ，ｇ／Ｌ）白细胞介素１１３处理６　ｈ后收集上清　液和细胞。采用细胞总ＲＮＡ　ＴＲＩｚｏｌ试剂提取ＲＮＡ，在紫外分光光度计确定总ＲＮＡ的浓度和纯度，并在１２　ｇ／Ｌ的琼脂糖凝胶　中电泳，凝胶成像分析ＲＮＡ的质量。应用实时荧光定量聚合酶链反应的方法检测细胞内基质金属蛋白酶３基因的表达量。　结果：①细胞总ＲＮＡ质量及纯度：每份样品取４　Ｌ稀释至４００　ｐ，Ｌ测定其　。ｏ　ａｏｎ　吸光度比值均在１．８～２．０之间，说明所　提ＲＮＡ纯度较高；电泳图片上可见ＲＮＡ清晰的１８　Ｓ和２８　Ｓ的条带，无弥散，说明ＲＮＡ质量较好。②目的基因的表达量：同　剂量白细胞介素１１３作用下，基质金属蛋白酶３基因的表达量在２　ｈ时开始发生上调，８　ｈ达高峰，而后开始下降；在不同剂量　白细胞介素１１３作用下，基质金属蛋白酶３基因的表达量在实验刺量范围内随着白细胞介素１１３的剂量加大呈上升趋势（ｒ＝　０．９０４，尸：Ｏ．０００），２０　ｐ，ｇ／Ｌ和４０　ｐ，ｇ／Ｌ白细胞介素１１３作用下，基质金属蛋白酶３基因的表达量差异无显著性（尸＝Ｏ．１５４），其　余各剂量问基质金属蛋白酶３基因的表达量差异均有显著性（尸＜０．０５）。　结论：炎症因子白细胞介素１１３能促进冠状动脉平滑肌细胞中斑块稳定相关标记物基质金属蛋白酶３的表达，可能是炎症在急　性冠状动脉综合征发生发展中的作用机制之一。　关键词：冠状动脉疾病；白细胞介素１；基质金属蛋白酶类　张清华，夏爱祥，蒋知新，黄平，方效民，王志津，宋成运，赵婷．人冠状动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶３与白细胞介素１Ｂ的相关性【Ｊ】．中国　组织工程研究与临床康复，２００７，１　１（１４）：２６１７・２６２０　［ｗｗｗ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍｌｚｇｌｃｋｆｌｅｊｏｕｒｎａｌｌｕｐｆｉｌｅｓｌ０７・１４／１４ｋ・２６１７（ｐｓ）．ｐｄｔｌ　常重要的作用。本实验应用炎症因子白细胞介　０引言　素１１３刺激冠状动脉平滑肌细胞，观察其中基　质金属蛋白酶３的表达变化。　大量研究表明急性冠状动脉综合征的发——　生和不稳定斑块的破裂有关，不稳定斑块具有　１　材料和方法　较薄的细胞外基质，而基质金属蛋白酶３能降　解细胞外基质，在不稳定斑块的形成中有着非　设计：单一样本观察。　沈阳１２００邮政信箱１１０００４　ｋｆ２３３８５０８３＠ｓ￣ａ．ｃｏｍ　ｗ＇ｗｗ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ　Ｚｈａｎｇ　Ｑｉｎｇ－ｈｕａ，　Ｃｈｉｅｆ　ｐｈｙｓｉｃｉａｎ．　Ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ，Ｔｕｔｏｒ　ｏｆ　ｄｏｃｔｏｒ．　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｇｅｒｅｏｌｏｇｙ．ｔｈｅ　３０５　ＨｏｓｐｉｔａＩ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ＰＬＡ．　Ｂｅｌｌｉｎｇ　１０００１７．Ｃｈｉｎａ　ｘｐｒｏｄｉｇａｌ＠１６３　ｃｏｍ　Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ：ｔｈｅ　Ｍｅｄｉｃａｌ　ＨｅａＲｈ　Ｐｌａｎｎｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｒｍｙ　Ｆｏｒｃｅ　ｄｕｄｎｇ　ｔｈｅ　Ｔｅｎｔｈ．Ｆｉｖｅ－Ｙｅａｒ　ｐｅｎｏｄ．Ｎｏ．０４ＬＸ０４８　Ｒｅｃｅ　Ｊｖｅｄ：２０Ｏ６—１　０－１２　Ａｃｃｅ｝ｐｔｅｄ：２００７－０１－０９　解放军第三０五医　院，’老年病中　，　中　实验室。’内　六科．北京市　１０００１７　张清华，男，１９５０年　生．江苏省泗阳县　人。汉族，１９７６年山　西医学院毕业，主任　医师，教授，博士生　导师，主要从事Ｉ心血　管疾病的研究。　ｘｐｒｏｄｉｇａｌ＠１６３．ｃｏｍ　全军医药卫生“十　五”计划课题　（０４ＬＸ０４８）　中圈分类号：Ｒ５４３　３　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７３－８２２５　ｆ２００７）１４－０２６１７－０４　收稿日期：２００６－１０・１２　修日日期ｉ２００７－０１－０９　（０６－５０－９－７３６８／Ｗ・ＬＬ）　２６１７　维普资讯 http://www.cqvip.com

ＩＳＳＮ　１６７３．８２２５　ＣＮ　２１－１５３９／Ｒ　张清华，等．人冠状动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶３与白细胞介素　的相关性　ｗｗ￣．７＿＃ｌｃｋｆ．ｃｏｍ　ｋｆ２３３８５０８３＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ　诵暂　研究已　单位：解放军第三。五医院老年病中心。　胶成像分析。　２　ｍＬ离心　蓑盖袭　豢蠢器　材料：实验于２００５—１０／２００６—０８在解放　ｃＤＮＡ的合成：①在无菌的０．靠霉量萎毒　军第三。五医院老年病中心实验室完成。细　管中准备ＲＮＮ引物混合物：ＲＮＡ　５　Ｌ＋　／Ｌ的ｄＮＴＰ　１￣Ｌ＋５００　ｍｇ／Ｌ的Ｏｌｉｇｏ　裴嚣　胞：人冠状动脉平滑肌细胞（ＨＣＡＳＭＣ，　１０　ｍｍｏｌｄＴ）１　Ｌ＋ＤＥＰＣ处理Ｈ２Ｏ　５　Ｌ。②６５℃温　孝前　临　毒　Ｃａｓｅｃａｄｅ公司）。试剂：２３１培养基及添加剂、　（ｎ，然后冰上放置１　ｍｉｎ。⑧准备以下反　和急性冠状动脉　胰酶（ｃａｓｅｃａｄｅ公司），白细胞介素１　１３　育５　ｍｉ藉　，　妻（ＰｅＰｒｏｔｅｃｈ公司），ＴＲＩＺＯＬ　Ｒｅａｇｅｎｔ　应混合物，按所示顺序添加各组分：５×ＲＴ　ｆｅｒ４　Ｌ＋０．１　ｍｏｌ／Ｌ的ＤＴＴ　２￣Ｌ＋４０　Ｕ／Ｉ￣Ｌ　参攀囊蓄昱　（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＵＳＡ）、Ｓｅｔ　ｏｆ　ｄＡＴＰ，ｄＣＴＰ，　ＢｕｆＩｎｈｉｂｉｔｏｒ　１　Ｌ。④将７　Ｌ的反应混合物　蓑鍪　砻ｄＧＴＰ，ｄＴＴＰ（Ｐｒｏｍｅｇａ，ＵＳＡ）、Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）　ＲＮａｓｅ　成纤溶酶原激活　１５－１８　Ｐｒｉｍｅｒ（上海生工生物科技有限公司）、　加至每个ＲＮＮ引物混合物中，轻轻混匀，３７℃　差差曩　爨蓉Ｍ．ＭＬＶ　Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｅ（Ｉ　ｎｖｉｔｒ０ｇｅｎ，　温育２　ｍｉｎ。⑤每管加入１　ｐ，Ｌ（２００　Ｕ／Ｉ￣Ｌ）的　ｎ　鸳　蓁　羹ＵＳＡ）、ＲＮａｓｉｎ　Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　Ｍ－ＭＬｖ反转录酶，混匀，３７℃温育５０　ｍｉｎ终止反应，冰浴。⑥最后每管　薯　釜雾鐾善（Ｐｒｏｍｅｇａ，ＵＳＡ）、Ｔａｑ　ＤＮＡ　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　后，７０℃、１５　ｍｉ影响。　（ＴａＫａＲａ，Ｊａｐａｎ）、Ａｇａｒｏｓｅ　（Ｐｒｏｍｅｇａ，　加入１　Ｌ　ＲＮａｓｅ　Ｈ（２　Ｕ／Ｉ￣Ｌ），并于３７℃温　ＵＳＡ）、溴化乙锭（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ）、Ｌｏａｄｉｎｇ　育２０　ｍｉｎ。　Ｂｕｆｆｅｒ（ＴａＫａＲａ，Ｊａｐａｎ）、ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　ＰＣＲ　荧光定量聚合酶链反应：基质金属蛋白酶　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ试剂盒（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，　３引物应用软件（ｐｒｉｍｅｒ５和ｏｌｉｇｏ６）自行设　ＵＳＡ）。仪器：　ＭＣＯ－１７ＡＩＣＯ２恒温培养箱　计，长度为１８６　ｂｐ，Ｆ：５’－ＴＡＴ　ＧＧＡ　ＣＣＴ　５’．ＡＧＧ　ＴＴＣ　（ＳＡＮＹＯ，Ｊａｐａｎ）、ＣＫ２型倒置显微镜　ＣＣＣ　ＣＣＴ　ＧＡＣ　ＴＣＣ．３’，Ｒ：（Ｏｌｙｍｐｕｓ，Ｊａｐａｎ）、细胞超净工作台（北京昌　ＡＡＧ　ＣＴＴ　ＣｃＴ　ＧＡＧ　Ｇ－３’；看家基因　平长城空气净化工程公司）、Ｕｌｔｒｏｓｐｅｃ　（ＧＡＰＤＨ长度）为１０８　ｂｐ，Ｆ：５’一ＣＡＴ　ＣＣＡ　Ｒ：５’．ＣＣＡ　３１００ｐｍ型紫外分光光度计（Ａｍｅｒｓｈａｍ　ＴＧＡ　ＣＡＡ　ＣＴＴ　ＴＧＧ　ＴＡＴ　Ｃ．３’，Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＵＫ）、ＤＹＣ一３１　Ｄ型电泳仪　ＴＣＡ　ＣＧＣ　ＣＡＣ　ＡＧＴ　ＴＴＣ－３’（北京赛百胜科　（北京六一仪器厂）、ＧＥＬ—ＤＯＣ２０００型紫外凝　技有限公司制备合成）。反应体系（２０　Ｌ）如　胶成像系统（Ｂｉｏ—Ｒａｄ，ＵＳＡ）、ＰＴＣ２００　ＰＣＲ　下：２×ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ聚合酶链反应Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ　扩增仪（ＭＪ，ＵｓＡ）、７５００型实时荧光定量聚　１０　Ｌ＋基质金属蛋白酶３上下游引物各１　Ｌ＋　合酶链反应仪及分析软件ＳＤＳ（Ａｐｐｌｉｅｄ　ｃＤＮＡ　２　Ｌ＋ＤＥＰＣ处理蒸馏水６　Ｌ，短暂　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＵＳＡ）。　离心后在７５００型实时荧光定量聚合酶链反应　设计、实施、评估者：设计、实施为第一、　仪上进行扩增。反应条件：５０℃２　ｍｉｎ，９５℃　ｎ，（９５℃１５　ｓ＋６０℃１：０５　ｍｉｎ）ｘ５０循　二、三作者，全部作者参加评估，均受过专业培　１０　ｍｉ训。　方法：　’　环。　主要观察指标：④细胞总ＲＮＡ质量及纯　统计学分析：应用ＳＰＳＳ　１０．０软件进行　细胞培养及处理：人冠状动脉平滑肌细胞　度。②目的基因的表达量。　在３７℃、体积分数为０．０５的ＣＯ　条件下常规　培养。实验用５－７代的细胞，按２．５ｘｌ０。Ｌ　密　分析，所得数据用Ｉ＋ｓ表示，多组间比较用单　度接种于２５　ｃｍ　的培养瓶中，２４　ｈ后换液，生　因素方差分析检验，两两比较应用ＳＮＫ法检　长接近８０％融合时进行如下处理：①２０　Ｉ￣ｇ／Ｌ　验，并进行ｓｐｅａｒｍａｎ相关分析，Ｐ＜０．０５为　质量浓度白细胞介素１Ｂ培养０，２，４，８，２４，　差异有统计学意义。　３６　ｈ后收集上清夜和细胞。②不同质量浓度　（０，５，２０，４０　Ｉ￣ｇ／Ｌ）白细胞介素１Ｂ处理６　ｈ后　２结果　收集上清液和细胞。　细胞总ＲＮＡ提取：采用细胞总ＲＮＡ　２．１　细胞总ＲＮＡ质量及纯度检验①每份　ＴＲＩＺ０Ｉ试剂提取ＲＮＡ，严格按照试剂说明书　样品取４　Ｌ稀释至４００　ｐ，Ｌ测定其　６０　进行提取。取少量提取ＲＮＡ在紫外分光光度　８０　吸光度比值均在１．８～２．０之间，说明所　计２６０　ｎｍ和２８０　ｎｍ下确定浓度和纯度，并　提ＲＮＡ纯度较高。②取稀释后的ＲＮＡ　１　Ｌ　在１２　ｇ／Ｌ的琼脂糖凝胶中电泳，然后进行凝　与Ｌｏａｄｉｎｇ　Ｂｕｆｆｅｒ混匀后，在１０　ｇ／Ｌ的琼脂糖　２６１８　Ｐ　Ｏ．Ｂｏｘ　１２００．Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１　１０００４　ｋｆ２３３８５０８３；＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ　ＷＷＷ．ｚｇｌｃｋｆ．ＣＯｍ　维普资讯 http://www.cqvip.com

维普资讯 http://www.cqvip.com

ＩＳＳＮ　１６７３－８２２５　ＣＮ　２１－１５３９／Ｒ　张清华，等．人冠状动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶３与白细胞介素１Ｂ的相关性　ｖ４ｗＫｚｇ／￣．ｃｏｍ　ｋｆ２３３８５０８３＠ｓｉｎａ，ｃｏｍ　用减弱，导致斑块趋向于不稳定化并最终破裂，引发急　察冠状动脉平滑肌细胞中基质金属蛋白酶３表达量的　性冠状动脉综合征。基质金属蛋白可根据其酶的底物　变化。结果有助于对炎症在急性冠状动脉综合征发生　敏感性不同分４类：①间质胶原酶（基质金属蛋白酶１，　发展中重要作用机制的认识，降解细胞外基质的重要　８，１３，１８）主要降解胶原纤维（Ｉ、Ⅱ、Ⅲ型胶原）。②明　酶系——基质金属蛋白酶可能是其作用途径之一。　胶酶（基质金属蛋白酶２，９）主要降解弹性蛋白及基底　膜的主要成分Ⅳ型胶原。③问质溶解素（基质金属蛋白　４参考文献　酶３，７，１０，１１，１２）可降解多数细胞外基质成分，包括　蛋白多糖、层粘连蛋白、纤维粘连蛋白。④膜型金属蛋　白酶（基质金属蛋白酶１４，１５，１６，１７），能直接降解几　种细胞外基质成分。在众多的基质金属蛋白酶中，基质　金属蛋白酶３显得尤为重要，因为其底物广泛，可以单　１　Ｒａｍｉｎ　Ｒ．　Ｅｒｉｃ　ＪＴ．　Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ　ｔｏ　ａｃｈｉｅｖｅ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ａｒｔｅｄａＩ　ｐｌａｇｕｅ　ｓｔａｂｌｉｚａｔｉｏｎ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ　Ｒｅｓ　１９９９：４１：４０２４１７　２　３　Ｄａｖｉｅｓ　ＭＪ．Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ａｃｕｔｅ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｈｅａｒｔ　２０００；　８３（４）：３６１・３６６　Ｄｉｎｇ　ＳＦ。Ｚｈａｎｇ　Ｙ，Ｚｈａｎｇ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ　ｐｌａｑｕｅ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ａｃｕｔｅ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　Ｚｈｏｎｇｈｕａ　Ｘｉｎ　Ｘｕｅ　Ｇｕａｎ　Ｂｉｎｇ　Ｚａ　Ｚｈｉ　２００６；３４（６）：５１２－５１４　４　Ｚｈｏｕ　ＺＸ．Ｑｉａｎｇ　Ｈ，Ｍａ　Ａ０。ｅｌ　ａｌ＿Ｍｅａｓｕｍｍｅｎｔ　ｐｅｄｐｈｅｒａＩ　ｂｌｏｏｄ　ｉｎｄｅｘ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｏｘ－ＬＤＬ．ｏｘ－ＬＤＬＡｂ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　独降解构成细胞外基质的大部分成分，同时又可以激　活基质金属蛋白酶１、基质金属蛋白酶８、基质金属蛋　ｈｅａｒｔ　ｄｉｓｅａｓｅ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｃｌｉｎｉｃａＩ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．Ｚｈｏｎｇ　Ｎａｎ　Ｄａ　Ｘｕｅ　Ｘｕｅ　Ｂａｏ　Ｙｉ　白酶９的活性”　，共同参与细胞外基质的降解过程。基　质金属蛋白酶３与能够激活的其他酶原形成一正反馈　环，在基质金属蛋白酶家族激活过程中具有关键作用。　刘丹等”５】研究发现基质金属蛋白酶３水平在急性冠状　动脉综合征患者中显著升高。　１９９９年ＲＯＳＳ［　ｌ提出动脉粥样硬化是炎症性疾　病，炎症在不稳定斑块的发生、演变及破裂过程中起着　至关重要的作用［１６，１７］。尸检发现在不稳定或破裂的动脉　粥样斑块内聚集着泡沫细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和肥　Ｘｕｅ　Ｂａｎ　２００６；３１（２）：２５８－２６２　５　Ｌｉ　Ｊ．Ｚｈａｏ　ＳＰ，Ｐｅｎｇ　ＤＱ。ｅｔ　ａ１．Ｃｈａｎｇｅｓ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｏｌｕｂｌｅ　ｐｌａｓｍａ　ＣＤ４０Ｌ　ａｎｄ　ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－９　Ｉｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ｈｅａｒｔ　ｄｉｓｅａｓｅ．Ｚｈｏｎｇ　Ｎａｎ　Ｄａ　Ｘｕｅ　Ｘｕｅ　Ｂａｏ　Ｙｉ　Ｘｕｅ　Ｂａｎ　２００４；２９（５）：　５１７．５２０　６　Ｆｉｔｚｓｉｍｍｏｎｓ　ＰＪ，Ｆｏｒｏｕｇｈ　Ｒ。Ｌａｗｒｅｎｃｅ　ＭＥ，ｅｔ　ａ１．Ｕｄｎａｒｙ　Ｉｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　９　ａｎｄ　２　ａｎｄ　ｔｉｓｓｕｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆ　ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｏｒｏｎａⅣ　ａｒｔｅｒｙ　ｄｉｓｅａｓｅ　Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　２００６；２８　７　Ｆｕｒｕｈｏｌｍ　Ｊ，　Ｓｏｒｓａ　Ｔ，　Ｑｖａｍｓｔｒｏｍ　Ｍ，　ｅｔ　ａ１．　Ｓａｌｉｖａｒｙ　ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－８　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｎｄ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ｈｅａｒｔ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｍａｙ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ａｎ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉ¨Ｉｖ　ｔｏ　ｐｅｒｉｄｏｎｔｏａＩ　ｄｉｅａｓｓｅ．　Ｊ　Ｐｅｒｉｄｏｎｔｏａｌ　Ｒｅｓ　２００６；４１（５）：４８６－４８９　８　单岩，徐析，单菲．血清ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９水平对急性冠状动脉综合征的诊断　及预后判断价值【Ｊ】．第三军医大学学报，２００５，２７（１８）：１９０９　９　Ｚｅｎｇ　Ｂ，Ｐｒａｓａｎ　Ａ，Ｆｕｎｇ　ＫＣ，ｅｔ　ａ１．Ｅｌｅｖａｔｅｄ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｍａｔｒｉｘ　大细胞，其中巨噬细胞数目不稳定斑块是稳定斑块的　４倍”。　；在斑块最易于破裂的肩部，炎症细胞浓度最　高，均提示炎症导致斑块不稳定，易破裂”　。研究发现　不稳定斑块内的泡沫细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和肥大　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－９　ａｎｄ－２　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ａｒｔｅｒｙ　ｄｉｓｅａｓｅ．Ｉｎｔｅｒｎ　Ｍｅｄ　Ｊ　２００５；３５（６）：３３１３３．３３１３５　１０　Ｔａｙｅｂｊｅｅ　ＭＨ，Ｎａｄａｒ　Ｓ，Ｂｌａｎｎ　ＡＤ．ｅｔ　ａ１．Ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－９　ａｎｄ　ｔｉｓｓｕｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ．１　ｉｎ　ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｔｏ　ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ　ｒｉｓｋ　ａｎｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ：　ａ　ｓｕｂ－ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｎｇｌｏ－Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ　Ｃａｒｄｉａｃ　Ｏｕｔｃｏｍｅｓ　ＴｒｉａＩ（ＡＳＣＯＴ）．Ａｍ　Ｊ　Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ　２００４；１７（９）：７６４—７６９　１　１　Ｈｕａｎｇ　Ｊ，Ｗａｎｇ　ＭＨ，Ｐｅｎｇ　ＸＰ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｘｕｅｚｈｉｋａｎｇ　ｏｎ　ｓｅｒｕｍ　Ｉｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｓｅｎｓｉｔｉｅ－Ｃ　ｒｖｅａｃｔｉｖｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ．　ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－９　ａｎｄ　ｌｉｏｐｒｐｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｃｕｔｅ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ．　Ｚｈｏｎｇｇｕｏ　细胞等炎症细胞聚集【２０ｌ，分泌的致炎因子如白细胞介　素１，６，８，肿瘤坏死因子０【，＾ｙ一抗干扰素，Ｐ一选择素，细　胞黏附分子１等加速了动脉粥样硬化的过程。且白细　胞介素１１３、白细胞介素６等炎症标志物在斑块内的表　达也明显升高，甚至在全身血循环中的浓度也会升高。　本实验应用不稳定斑块中最常见的炎症因子白细胞介　素１１３刺激人冠状动脉平滑肌细胞，结果表明炎症因子　能够在基因转录水平上调人冠状动脉平滑肌细胞中基　质金属蛋白酶３的表达，并且呈剂量依赖效应。结果提　示不稳定斑块中炎症因子和炎症反应的存在可能是基　Ｚｈｏｎｇ　Ｘｉ　Ｙｉ　Ｊｉｅ　Ｈｅ　Ｚａ　Ｚｈｉ　２００６：２６（３）：２２１－２２３　１２　Ｄｏｎｇ　ＳＨ．Ｗａｎ　ＪＭ，Ｌｕｏ　ＬＪ。ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　４０　ｍｇ　ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ　ｏｎ　ｓｅｒｕｍ　ｌｉｐｉｄｓ．　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｍａｒｋｅｒｓ　ａｎｄ　ｃｌｉｎｉａＩｃ　ｅｖｅｎｔｓ　ｉｎ　ＡＣＳ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｐｏｓｔ　ＰＣＩ．Ｚｈｏｎｇｈｕａ　Ｘｉｎ　Ｘｕｅ　Ｇｕａｎ　Ｂｉｎｇ　Ｚａ　Ｚｈｉ　２００６；３４（４）：　３５３－３５６　１　３　Ｄｅｎｇ　Ｐ，Ｚｈａｏ　ＳＰ，Ｈｕａｎｇ　ＨＧ，ｅｔ　ａ１．Ｓｉｇｎｉｉｆａｎｃｅ　ａｎｄ　ｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ－２　ｍＲＮＡ　ｉｎ　ＰＯｄｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｃｕｔｅ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ．　Ｚｈｏｎｇ　Ｎａｎ　Ｄａ　Ｘｕｅ　Ｘｕｅ　Ｂａｏ　Ｙｉ　Ｘｕｅ　Ｂａｎ　２００５；３０ｆ４）：４０３－４０６　１４　Ｇａｌｉｓ　ＺＳ，Ｓｕｋｈｏｖａ　ＧＫ，Ｋｒａｎｚｈｏｆｅｒ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｆｏａｍ　ｃｅｌｌｓ　ｆｏｍ　ｅｘｐｅｒｉｒｍｅｎｔａｌ　ａｔｈｅｒｏｍａ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅｌｙ　ｐｒｏｄｕｃｅ　ｍａｔｒｉｘ．ｄｅｇｒａｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ．Ｐｒｏｃ　ＮａｔＩ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ　１９９５：９２【２）：４０２－４０６　１５　刘丹，张清华，蒋知新，等．超敏Ｃ反应蛋白、ＭＭＰ－３与ＴＩＭＰ－１在急性冠状　动脉综合征的表达【Ｊ】．实用医药杂志，２０ｏ６，２２（４）：２９６－２９８　１６　Ｒｏｓｓ　Ｒ．　Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ－ａｎ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｄｉｓｅａｓｅ．　Ｎｅｗ　ＥｎｇＩ　Ｊ　Ｍｅｄ　质金属蛋白酶表达上调的原因。正常的纤维帽主要由　血管平滑肌细胞分泌的胶原和基质构成，在不稳定斑　１９９９；４０ｆ３２）：１　１５－１２６　１７　Ｂｉａｓｕｃｃｉ　ＬＭ．Ｃｏｌｉｚｚｉ　Ｃ．Ｒｉｚｚｅｌｌｏ　Ｖ．ｅｔ　ａ１．Ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ｕｎｓｔａｂｌｅ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ａｒｔｅｒｙ　ｄｉｓｅａｓｅｓ．　ＳｃａｎｄＪ　Ｃ¨ｎ　Ｌａｂ　块中存在的炎症因素刺激斑块和血管结合部位的血管　１８　Ｉｎｖｅｓｔ　１９９９；５９（Ｓ２３０１：１２－２２　Ｎｅｗｂｙ　ＡＣ．　Ｚａｉｔｓｍａｎ　ＡＢ．　Ｆｉｂｒｏｕｓ　ｃａｐ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｒ　ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｔｈｅ　平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶３，自身及被其激活　的基质金属蛋白酶降解细胞外胶原和基质，使斑块纤　维帽变薄，导致斑块不稳定性增加，进而破裂引起急性　冠状动脉综合征发病，可能是其作用机制之一。　本实验体外模拟不稳定斑块的局部炎症条件，观　ｃｒｉｔｉａＩｉｃｍｐｏｒｔａｎｃｅ　ｏｆ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌＩ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍａｔｄｘ　ｆｏｒｍａＵｏｎ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ　Ｒｅｓ　１９９９；４１：３４５－３６０　１９　Ｋａａｒｔｉｎｅｎ　Ｍ，Ｐｅｎｔｔｉｌａ　Ａ。Ｋｏｖａｎｅｎ　ＰＴ．Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｍａｓｔ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｈｏｕｌｄｅｒ　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ａｔｈｅｒｏｍａ。１６ｅ９－１６７８　ｔｈｅ　ｐｒｅｄｉｌｅｃｔｉｏｎ　ｓｉｔｅ　ｏｆ　ａｔｈｅｒｏｍａｔｏｕｓ　ｒｕｐｔｕｒｅ．　Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　１９９４；９０【４）：　２０　陈翔，廖玉华．炎症与动脉粥样硬化【Ｊ】．中华心血管病杂志，２００４，３２（５）：　４７５．４７６　２６２０　Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ　１２００．Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１１０００４　ｋｆ２３３８５０８３＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ　ｗｗｗ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ