球花石楠黑斑病菌生物学特性

・６・　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｐｅｓｔ　ａｎｄ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｍａｒ．　２０１５　Ｎｏ．２　球花石楠黑斑病菌生物学特性　韩长志，李瑞强　（西南林业大学林学院，云南省森林灾害预警与控制重点实验室，云南昆明６５０２２４）　摘要：对球花石楠黑斑病菌Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｓｐ．生物学特性进行了研究。结果显示，该病原菌生长最适条　件为ＰＤＡ，２８℃，ｐＨ　８，碳源为麦芽糖，氮源为蛋白胨，明确该病菌可以较好地适应不同的光照条件　以及不同碳源、氮源等营养环境条件。　关键词：球花石楠；黑斑病；链格孢；生物学特性　中图分类号：￥７６３．１５文献标志码：Ａ文章编号：１６７１—０８８６（２０１５）０２—０００６—０４　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｏｆ　ｌｅａｆ　ｂｌａｃｋ　ｓｐｏｔ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎ　Ｐｈｏｔｉｎｉａ　ｇｌｏｍｅｒａｔａ／ＨＡＮ　Ｃｈａｎｇｚｈｉ，ｅｔ　ａ１．（Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｄｉｓａｓｔｅｒ　Ｗａｒｎｉｎｇ　ａｎｄ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｙｕｎｎａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ；Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　６５０２２４，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｈｔｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｏｆ　ｌｅａｆ　ｂｌａｃｋ　ｓｐｏｔ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｏｎ　Ｐｈｏｔｉｎｉａ　ｇｌｏｍｅｒａｔａ　ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｗａｓ　ＰＤＡ　ｍｅｄｉａ，２８　ｏＣ，ｐＨ　８，ａｎｄ　ｃａｒｂｏｎ　ｓｏｕｒｃｅ　ａｓ　ｍａｌｔｏｓｅ，ｎｉ￣ｏｇｅｎ　ｓｏｕｒｃｅ　ａｓ　ｐｅｐｔｏｎｅ，ｗｈｉｃｈ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｃｏｕｌｄ　ａｄａｐｔ　ｔｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｉｇｈｔ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ａｓ　ｗｅｌｌ　ａｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃａｒｂｏｎ　ｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ｎｕｔｒｉｅｎｔ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐｈｏｔｉｎｉａ　ｇｌｏｍｅｒａｔａ；ｌｅａｆ　ｂｌａｃｋ　ｓｐｏｔ　ｄｉｓｅａｓｅ；Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｓｐ．；ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　球花石楠Ｐｈｏｔｉｎｉａ　ｇｌｏｍｅｒａｔａ　Ｒｅｈｄ．ｅｔ　Ｗｉｌｓ．作　培养箱、黑暗条件）的病原菌菌落打成菌丝块接种　为云南省重要的乡土树种，已经广泛用于城市绿化　ＰＤＡ培养基上（不同的培养基、碳源和氮源测试除　和景观设计，但是近年来球花石楠黑斑病在昆明地　外），２８℃恒温培养（不同温度测试除外），观察和　区发病呈逐渐严重趋势，成为影响城市绿化的重要　描述病菌的菌落特征，用十字交叉法测量菌落直径，　因素之一。作者通过前期对球花石楠黑斑病的病害　统计分析病原菌生长差异。　调查以及病原菌分离、鉴定，明确该病害是由链格孢　１．２．１　不同培养基对病原菌菌丝生长的影响　共　属Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　Ｎｅｅｓ真菌引起　。本研究从不同培养　５种培养基，每种处理５个重复，培养５　ｄ。　基、温度、ｐＨ值、光照、通气条件以及不同碳源、氮源　①马铃薯葡萄糖培养基（ＰＤＡ）：马铃薯２００　ｇ、葡　等方面，对球花石楠黑斑病菌的生物学特性进行研　萄糖２０　ｇ、琼脂粉２０　ｇ、水１０００　ｍＬ；②马铃薯蔗糖培　究，以期解释链格孢属真菌寄主范围较广、分布较广　养基（ＰＳＡ）：马铃薯２００　ｇ、蔗糖２０　ｇ、琼脂粉２０　ｇ、水　的原因，也为进一步研究该病菌致病原因和防治提　１０００　ｍＬ；③燕麦培养基（ＯＡ）：燕麦片３０　ｇ、琼脂粉　供重要的理论依据。　２０　ｇ、水１０００　ｍＬ；④清水洋莱培养基（ＷＡ）：琼脂粉　１材料和方法　２０　ｇ、水１０００　ｍＬ；⑤玉米粉培养基（ＣＭＭ）：玉米粉　４０　ｇ、蔗糖１０　ｇ、琼脂粉２０　ｇ、水１０００　ｍＬ。　１．１　菌种球花石楠黑斑病菌分离于西南林业大学　校园内的球花石楠叶片，将获得的纯培养菌株保存在　收稿日期：２０１４—１０—３０　试管斜面于４℃冰箱中。菌种保藏于西南林业大学　基金项目：云南省优势特色重点学科生物学一级学科建设项目　（５００９７５０５），云南省高校林下生物资源保护及利用科技　植物病理学教研室，菌种编号ＱＨＳＮ一１。　创新团队（２０１４０１５），云南省教育厅科学研究基金项目　１．２病原菌生物学特性研究　（２０１４Ｙ３３０）　选择常规培养基ＰＤＡ培养病菌。即，用打孔器　作者简介：韩长志（１９８１一），男，博士，讲师，河北石家庄人，从事经　济林木病害生物防治与真菌分子生物学的科研工作，Ｅ—　（直径７　ｍｌｎ）将ＰＤＡ培养基上培养７　ｄ（２８℃恒温　ｍａｉ１：ｈａｎｃｈａｎｇｚｈｉ２０１０＠１６３．ｔｏｍ。　中国森林病虫　２０１５年３月　第３４卷　第２期　・一７・　１．２．２不同温度对病原菌菌丝生长的影响　将病　的固体培养基，每种处理重复５次，培养５　ｄ。　原菌分别置于５，１１，２２，２８，３７　ｏＣ的恒温培养箱中培　１．３数据统计与分析用Ｅｘｃｅｌ　２００７对原始数据　养，每种处理重复５次，培养５　ｄ。　进行分析、处理和作图。所有图形中的正负偏差均表　１．２．３不同ｐＨ值对病原菌菌丝生长的影响　在　示标准误（ｓＥ），利用Ｅｘｃｅｌ中的程序ＳＥ：ＳＴＤＥＶ　无菌条件下用１　ｍｏＶＬ的ＮａＯＨ溶液和１　ｍｏｌ／Ｌ的　（ｒａｎｇｅ　ｏｆ　ｖａｌｕｅｓ）／ＳＱＲＴ（ｎｕｍｂｅｒ）进行计算。　盐酸溶液调节灭菌的ＰＤＡ培养基ｐＨ值，设ｐＨ值　为３，４，５，６，７，８，９，１０，１１等９个梯度，每种处理重　２结果与分析　复５次，培养５　ｄ。　２．１　不同培养基对病原菌菌丝生长的影响　球花　１．２．４　不同光照条件对病原菌菌丝生长的影响　石楠黑斑病菌除在ＷＡ培养基上生长不好外，在其　不同光照条件采用光照４　ｄ、黑暗４　ｄ和光照黑暗各　他培养基上都生长较好，尤以在ＰＳＡ、ＰＤＡ上生长　２　ｄ（光暗交替）３种处理，黑暗条件用有盖黑色纸筒　最快，且菌丝最为密集（图１）。病原菌在不同培养　罩住。每种处理重复５次，培养４　ｄ。　基上所形成的菌落颜色不同，ＰＳＡ、ＰＤＡ培养基上的　１．２．５　不同通气条件对病原菌菌丝生长的影响　菌落颜色为灰色至黑暗色，而ＣＭＭ、ＯＡ培养基上　采用培养皿Ｐａｒａｉｆｌｍ胶带封口和不封口２种方法进　的菌落则灰色至红褐色（表１）。　行。每种处理重复５次，培养５　ｄ。　１．２．６不同碳源对病原菌菌丝生长的影响　以查　氏培养基为基础，以不加碳源为对照，用含有相当量　拿　昌　碳的葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、可溶性淀粉等多种　曼　碳源代替查氏培养基中蔗糖，做成不同碳源的固体　培养基，每种处理重复５次，培养５　ｄ。　１　坦　１．２．７不同氮源对病原菌菌丝生长的影响　以查　氏培养基为基础，以不加氮源为对照，用含有相当氮　的硝酸铵、磷酸二氢铵、牛肉膏、蛋白胨、甘氨酸等多ＰＳＡ　ＰＤＡ培　类　ｏＡ　ｗＡ　种氮源代替查氏培养基中的硝酸钠，做成不同氮源　图１不同培养基对病原菌菌丝生长速率的影响　表１　不同培养基上的病原菌菌落形态特征　｛注：“＋”一般；“＋＋”密；“＋＋＋”较密；“＋＋＋＋”紧密。　２．２不同温度对病原菌菌丝生长的影响　从图２　３７℃条件下，病原菌菌丝不能正常生长，将其转移　可以看到，在设置的１１，２２，２８℃条件下，菌丝均能　至２８℃条件下继续培养后，菌丝又能恢复生长，说　正常生长，尤以２８℃时菌丝生长最快；而在５，　明５℃的低温和３７℃高温并未将该病原菌杀死，只　是抑制了生长。因此，球花石楠黑斑病病菌生长的　最适温度为２８℃。后续研究选择该温度对病菌进　行恒温培养。　２．３不同ｐＨ值对病原菌菌丝生长的影响在ｐＨ　４～１１时病原菌都能生长，尤以ｐＨ　６～９时病原菌生　长较快，其中，ｐＨ　８时菌丝生长速率最快，其次为６，　７；病原菌在极酸条件（ｐＨ为３，４，５）下不能生长，或　不同温度，℃　受到抑制（图３）。可见，病原菌菌丝适宜在中性至　图２不同温度对病原菌菌丝生长速率的影响　偏碱性环境生长，极酸环境不利生长。　・３０・　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｐｅｓｔ　ａｎｄ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｍａｒ．　２０１５　Ｎｏ．２　ｒ；ｒ；ｒｉ　ｒ｝　［ｒＬ　一　报，２ｏ１２，３４（ｓ１）：１５８—１６３．　．　ｍ　Ｉｎ　￡ｊ　　ｊＭ　　ｊ＂　　］　］　加　大学出版社，２０１２．　［３］　陈俊愉，程绪珂．中国花经［Ｍ］．上海：上海文化出版社，１９９０：　ｌｌ１一ｌ１６．　［２２］　黄保宏，邹运鼎，毕守东，等．梅园昆虫群落特征、动态及优势　种生态位［Ｊ］．应用生态学报，２００５，１６（２）：３０７—３１２．　［２３］　萧刚柔．中国森林昆虫［Ｍ］．第２版．北京：中国林业出版社，　１９９２．　［４］　陈俊愉，张启翔，李振坚，等．梅花抗寒品种之选育研究与推广　问题［Ｊ］．北京林业大学学报，２００３，２５（ｓ２）：１—５．　［５］　陈俊愉．梅花研究六十年［Ｊ］．北京林业大学学报，２００２，２４　（５／６）：２２４—２２９．　［２４］　娄杰，张铁利，张明宏，等．老秃顶子国家级自然保护区小蠹　虫发生危害调查［Ｊ］．中国森林病虫，２００６，２５（４）：３２—３５．　［２５］　邱强．中国果树病虫原色图鉴［Ｍ］．郑州：河南科学技术出版　社，２００４．　［６］　楚艳玲．引种梅花品种在库尔勒地区常见病虫害及防治［Ｊ］．　中国园艺文摘，２０１３（１１）：１４０—１４１．　［７］　陈俊愉．梅品种国际登录的五年——写在《中国园林》系统刊　登梅国际登录品种彩照专页之前［Ｊ］．中国园林，２００４（１）：　４５—４６．　［２６］　廖定熹，李学骝，庞雄飞，等．中国经济昆虫志：第三十四册膜　翅目小蜂总科（一）［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８７．　［２７］　王新苗．西北农林科技大学园艺试验站害虫监测系统的建立　［Ｄ］．杨凌：西北农林科技大学，２００８．　李长安．茶翅蝽Ｈａｌｙｏｍｏｒｐｈａ　ｈａｌｙｓ（ｓｔ矗１）的生物学研究及其　防治［Ｊ］．山西大学学报，１９８２（１）：８２—８４．　邱强．果树病虫害诊断与防治彩色图谱［Ｍ］．北京：中国农业　科学技术出版社，２０１３．　［２８］　张欣，李修炼，粱宗锁，等．不同环境温度下大草蛉对黄精主　要害虫二斑叶螨的控害潜能评估［Ｊ］．环境昆虫学报，２０１２，　３４（２）：２１４—２１９．　章士美．中国经济昆虫志：第三十一册半翅目（一）［Ｍ］．北　京：科技出版社，１９８５．　［２９］　赵琴，陈婧，刘凤想，等．大草蛉对桃蚜和夹竹桃蚜的捕食作　用研究［Ｊ］．环境昆虫学报，２００８，３０（３）：２２０—２２３．　［３Ｏ］　任顺祥，王兴民，庞虹，等．中国瓢虫原色图谱［Ｍ］．北京：科　王绪捷．河北森林昆虫图册［Ｍ］．石家庄：河北科学技术出版　社．１９８５．　学出版社，２００９．　［３１］　曾斌．异色瓢虫人工大量繁殖与田间释放技术研究［Ｄ］．武　汉：华中农业大学，２０１３．　徐公天，杨志华．中国园林害虫［Ｍ］＋北京：中国林业出版社，　２０ｏ７．　中国农业科学院果树研究所．中国果树病虫志［Ｍ］．北京：农　业出版社，１９６０．　［３２］　庞雄飞，毛金龙．中国经济昆虫志：第十四册鞘翅目瓢虫科　（二）［Ｍ］．北京：科学出版社，１９７９．　［３３］　黄春梅，成新跃．中国动物志：昆虫纲第五十卷双翅目食蚜　蝇科［Ｍ］．北京：科学出版社，２０１２．　［３４］　植保系昆虫教研组．华北灯下蛾类图志（上）［Ｍ］．涿县：华北　农业大学，１９７７．　徐公天．园林植物病虫害防治原色图谱［Ｍ］，北京：中国农业　出版社，２ｏ０３．　国家林业局森林病虫害防治总站．林业有害生物防治历（一）　［Ｍ］．北京：中国林业出版社，２０１０．　张广学，钟铁森．为害果树的瘤头蚜属新种和新纪录［Ｊ］．昆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