三参提取物抗大鼠肝纤维化作用的研究

维普资讯 http://www.cqvip.com 第１ｊ　４卷３期　８年９胃　天津医科大学学报　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＴＩＡＮＪＩＮ　ＭＥＤＩＣＡＬ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　Ｖｏ１．１４，Ｎｏ．３　Ｓｅｐ．２　００８　３６５　三参提取物抗大鼠肝纤维化作用的研究　胡金芳，刘静，申秀萍，梅学仁　（天津药物研究院，天津３００１９３）　［摘要］目的：研究三参提取物灌胃给药对大鼠肝纤维化的预防和治疗作用。方法：采用皮下注射四氯化碳（ｃｃｈ）和腹　腔注射二甲基亚硝胺（ＤＭＮ）诱导的２种大鼠肝纤维化模型，观察三参提取物对大鼠肝纤维化的影响。结果：三参提取　物对２种肝纤维化大鼠有升高血清和肝脏中白蛋白（ＡＬＢ）含量，降低血清中Ⅳ型胶原、总胆红素（ＴＢｉＬ）和肝脏中　Ｈｙｐ、丙二醛（ＭＤＡ）含量，改善肝细胞损伤程度及肝纤维化、降低肝门静脉血压等作用。结论：三参提取物具有抗ＣＣｈ　和ＤＭＮ大鼠肝纤维化的作用，提示临床上可用于防治肝纤维化。　［关键词］三参提取物；肝纤维化；四氯化碳；二甲基亚硝胺；大鼠　［中图分类号］Ｒ５７５＋Ｒ５１２．６　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００６—８１４７（２００８）０３－０３６５—０４　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｓａｎｓｈｅｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ　ｏｎ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｉｂｒｏｓｉｆｓ　ｉｎ　ｒａｔ　ＨＵ　Ｊｉｎ－ｆａｎｇ，ＬＩＵ　Ｊｉｎｇ，ＳＨＥＮ　Ｘｉｕ－ｐｉｎｇ，ＭＥＩ　Ｘｕｅ－ｒｅｎ　（ＴｉａＩ１ｊｉｎ　Ｉｎｓｉｔｔｕｔｅ　ｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｔｉａｎｊｉｎ　３００１９３，Ｃｈｉｎａ）　ＡＢＳＴＲＡＣＴ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｐｒｅｃａｕｔｉｏｎａｒｙ　ａｎｄ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｓａｎｓｈｅｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ　ｏｎ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｉｆｂｒｏｓｉｓ　ｉｎ　ｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｗｏ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｃａｒｂｏｎ　ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ（ｃｃ　ａｎｄ　ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｄｉｍｅｔｈｙｌ　ｎｉｒｔｏｓａｍｉｎｅ（ＤＭＮ）ｗｅｒｅ　ａｄｏｐｔｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｓａｎｓｈｅｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ　ｏｎ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｉｆｂｒｏｓｉｓ　ｗｅｒｅ　ａｓｓａｙｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｓａｎｓｈｅｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ＡＬＢ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｓｅｒｕｍ　ａｎｄ　ｌｉｖｅｒ，ｌｏｗｅｒ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｔｙｐｅ　１Ｖ　ｃｏＨａｇｅｎ　ａｎｄ　ＴＢｉＬ　ｉｎ　ｓｅｒｕｍ，Ｈｙｐ　ａｎｄ　ＭＤＡ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ，　ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ　ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ　ｉｎｊｕｒｙ　ａｎｄ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ，ａｎｄ　ｒｅｄｕｃｅ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｐｏｒｔｌ　ｖｅｉｎ　ｂｌａｏｏｄ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ｅｔｃ．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｓａｎｓｈｅｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ　ｈａｓ　ａｎｔｉ－ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｅｆｆｅｃｔ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ　ｔｈａｔ　ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ　ａｎｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｉｆｂｒｏｓｉｓ　ｉｎ　ｃｌｉｎｉｃ．　ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ　Ｓａｎｓｈｅｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ；Ｈｅｐａｔｉｃ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ；Ｃａｒｂｏｎ　ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ；Ｄｉｍｅｔｈｙｌ　ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ；Ｒａｔ　肝纤维化是各种慢性肝病的病理学特征，是其　发展至肝硬化的必经阶段，阻断或逆转肝纤维化是　１．１．１受试药物三参提取物：由本院中药室提供　防治肝硬化的关键。扶正化瘀是中医治疗肝纤维化　的基本治则，而中医治疗慢性肝病多采用滋补肝肾、　活血养血的方法。三参由三七、丹参等中药组成，是　活血化瘀中药的代表，人肝肾和心肝经，兼有补益的　浸膏粉，干燥器中保存。　１．１．２阳性对照药鳖甲软肝片：内蒙古福瑞制药　有限公司生产，批号２００５０５０４。秋水仙碱片：昆明制　药股份有限公司生产，批号２００３０５０２。　１．１．３试剂ＣＣｈ：天津天河化学试剂厂生产。批号　作用，可用于预防和治疗肝纤维化【　。本研究以四氯　化碳（ＣＣＬ）和二甲基亚硝胺（ＤＭＮ）诱导大鼠肝纤维　化模型，观察三参提取物抗肝纤维化的作用。　１材料与方法　１．１材料与仪器　作者简介：胡金芳（１９８０一），女，研究实习员，学士，研究方向：药理毒　理学；申秀萍（１９６４．），女，研究员，学士，研究方向：药理毒理学。　２００１０９１７：橄榄油：中国医药集团上海化学试剂公司　生产，批号Ｆ２００２０８１９；胆固醇：天津市东方卫生材　料厂进口分装，批号０００５１０；猪油、玉米粉：市售；丙　氨酸转氨酶（ＡＬＴ）、天冬氨酸转氨酶（ＡＳＴ）、白蛋白　（ＡＬＢ）、总胆红素（ＴＢｉｌ）：中生北控生物科技股份有　限公司，批号０５０６０２；过氧化物歧化物（ＳＯＤ）、丙二　醛（ＭＤＡ）、Ｈｙｐ、蛋白试剂盒：南京建成生物工程研　维普资讯 http://www.cqvip.com

３６６　天津医科大学学报　第１４卷　究所；透明质酸（ＨＡ）、ＩＶ型胶原试剂盒：上海海军医　学生物技术中心；层粘连蛋白（ＬＮ）试剂盒：北京北　方生物技术研究所；ＤＭＮ：上海开明化学厂。　１．１．４实验仪器４２一型生化仪，Ｂｅｃｋｍａｎ公司生　产；ＳＮ一６９５Ａ型放免　测量仪，上海原子核研究所　日环仪器一厂；全自动生化测定仪：Ｏｌｙｍｐｕｓ　ＡＶ一６４０　型，日本产。　１．１．５实验动物Ｗｉｓｔａｒ大鼠，由天津药物研究院　动物室生产提供，分笼饲养在观察室中，中央空调自　动通风，室温（２２±４）ｃＩ＝，光照１２　ｈ，自由摄食饮水。　１．２方法　ＡＬＢ、ＨＡ、ＬＮ、ＩＶ型胶原。定位取肝组织，做病理组织　学检查（ＨＥ染色、Ｍａｓｓｏｎ纤维胶原染色）。剩余肝组　织进行ＳＯＤ、ＭＤＡ、Ｈｙｐ及蛋白测定。计量数据采用ｔ　检验；病理组织的病变程度用等级指数法【５，　４验，采　用组间比较。　１．２．２对ＤＭＮ诱导的大鼠肝纤维化的治疗作用　实验选用Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠８５只，体重１４０—１６０ｇ。除　预留１Ｏ只正常对照组外，其余大鼠每周第１　３天，　腹腔注射０．５％ＤＭＮ生理盐水稀释液２　ｍｌ／ｋｇ．共注　射３周诱导肝纤维化　。随机取２只模型大鼠，做病　理检查。将造模大鼠按体重随机分组，秋水仙碱组　１Ｏ只，其余各组１２只。按不同组每Ｅｔ灌胃给药１　次，连续３周。于末次给药后２　ｈ，戊巴比妥钠麻醉，暴　露门静脉，测定每只大鼠的门静脉压。腹主动脉取血，　取血清测定ＡＬＢ、ＴＰ、ＴＢｉｌ。定位取肝组织，做病理组　１．２．１对ＣＣ１．诱导的大鼠肝纤维化的防治作用试　验选用Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠８５只，体重１４０—１６０ｇ，按体　重随机分组，正常对照组９只，模型组１６只，其余各　组均１２只。除对照组外，其余各组动物皮下注射　ＣＣ１．诱导剂，首次注射ＣＣ１　原液５　ｍｌ／ｋｇ，以后每隔　３　ｄ注射４０％ＣＣ１４－橄榄油３　ｍｌ／ｋｇ，共６周［４１。在开始　２周喂饲２０％猪油加０．５％胆固醇的玉米粉饲料，在　３￣６周喂饲单纯玉米粉饲料诱导肝纤维化。在造模　织学检查。剩余肝组织进行Ｈｙｐ、ＭＤＡ及蛋白测定。　计量数据采用ｔ检验；计数数据采用　检验；病理组　织的病变程度用等级指数法测验，采用组间比较。　２结果　开始时即按不同组灌胃给予不同药物，每天１次，连　续６周。于末次给药后２４　ｈ，腹腔注射４０　ｍｇ］ｋｇ戊　巴比妥钠麻醉，眼眶静脉丛取血，离心收集血清测定　２．１　对ＣＣＬ模型大鼠血清指标的影响　三参提取　物能够提高血清ＡＬＢ含量，对ＨＡ的升高均有降低　趋势；ｘ，￣ＩＶ型胶原生成有抑制作用（见表１）。　表１三参提取物对ＣＣ！　模型大鼠肝纤维化血清指标的影响（ｉ　）　与对照组比较　Ｐ＜Ｏ．Ｏ１；与模型组比较＊Ｐ＜Ｏ．Ｏ５，　Ｐ＜Ｏ　Ｏ１　２．２对ＣＣＬ模型大鼠肝组织生化指标的影响三　２．３对ＣＣ１．模型大鼠肝组织病理学指标的影响三　参提取物能够显著增加肝组织中蛋白含量，降低　Ｈｙｐ含量（见表２）。　参提取物低剂量组大鼠肝纤维化程度显著轻于模型　组（见表３）。　表２三参提取物对ｃｃＬ模型鼠肝组织生化指标的影响　与对照组比较　ｐ＜０．０１；与模型组比较　Ｐ＜Ｏ　０５，　Ｐ＜０．Ｏ１，　Ｐ＜０．００１　维普资讯 http://www.cqvip.com

第３期　胡金芳，等．三参提取物抗大鼠肝纤维化作用的研究　３６７　ｔａ∞＝１．９６．　。＝２．５８与对照组比较　】＜Ｏ．Ｏ１；与模型组Ｉｔ；较　氏Ｏ．０５，　氏Ｏ．Ｏ１　２．４对ＤＭＮ模型大鼠的治疗作用　在治疗期间．　三参提取物对模型大鼠有一定的治疗作用（见表４）。　２．７对ＤＭＮ模型大鼠肝组织生化指标的影响显著升高蛋白含量（见表７）。　表７三参提取物对ＤＭＮ模型大鼠肝组织生化指标的影响　分组　剂量（ｍ￣Ｃｋｇ）Ｈｙｐ（ｍｇ／ｇ蛋白）ＭＤＡ（ｎｍｏｌ／Ｌ）蛋白（　三　参提取物能够非常显著降低ＭＤＡ、Ｈｙｐ含量，非常　表４三参提取物对ＤＭＮ模型鼠的治疗作用　与模型组比较　Ｏ．０５　２．５对ＤＭＮ模型大鼠门静脉压的影响三参提取　与对照组比较ａＰ＜０．０５，　”Ｐ＜Ｏ．Ｏ１，－－Ｐ＜Ｏ．００１　＜Ｏ．００１；与模型组比较　＜Ｏ．０５　物可显著降低模型大鼠的门静脉压力（见表５）。　表５三参提取物对ＤＭＮ模型鼠门静脉压的影响　２．８对ＤＭＮ模型大鼠肝组织病理学指标的影响　三参提取物对ＤＭＮ所致大鼠肝纤维化有明显　的治疗作用，减轻肝细胞变性、坏死的程度，纤维化　的程度亦显著改善（见表８）。　表８三参提取物对ＤＭＮ模型鼠肝纤维化病理组织学的影响　与对照组比较　氏０．００１：与模型组比较　Ｐ＜０．０５　２．６对ＤＭＮ模型大鼠血清指标的影响三参提取　物能够显著增加ＡＬＢ，低剂量组显著降低ＴＢｉｌ含量　（见表６）。　表６三参提取物对ＤＭＮ模型鼠血清指标的影响　ｏｅ＝１．９６，ｔ　。＝２．５８与对照组比较　＜Ｏ．０１；与模型组比较　ｔｏＰ＜Ｏ．Ｏ５　３讨论　ｃｃｈ对肝细胞膜有直接溶解作用，致使肝细胞　变性坏死。但是ｃｃｈ的毒性主要与其活性代谢产物　与对照组比较Ａｐ＜Ｏ．０５，　如．Ｏ１；与模型组比较　Ｐ＜０．０５，　Ｐ＜０．Ｏ１　有关，ＣＣｈ在肝细胞内被混合功能氧化酶代谢，生成　活泼的三氯甲烷自由基和氯自由基。这些自由基可　维普资讯 http://www.cqvip.com

３６８　天津医科大学学报　第１４卷　以使肝细胞中酶功能丧失、膜脂质过氧化、胞浆钙离　三参提取物能够改善ＣＣｈ和ＤＭＮ持续刺激诱　子浓度升高，导致肝细胞损伤坏死和纤维化。ＤＭＮ　诱导的大鼠肝纤维化是常用的非感染因素造成的肝　纤维化模型。类似于人类肝纤维化和肝硬化病理组　织学特征，现常用做实验性肝纤维化模型［ｓｌ。其原理　是ＤＭＮ进入肝脏可以引起肝细胞核酸和蛋白质甲　发的大鼠肝纤维化病理性损伤，降低ＭＤＡ、ＩＶ胶原、　Ｈｙｐ含量，减少肝细胞外基质合成和胶原蛋白沉积，　显示出具有保护肝细胞、抗肝纤维化的作用．其中抗　脂质过氧化反应在抗肝纤维化作用的过程中发挥了　重要的作用。　参考文献：　［１］王文兵，戴立里，郑元义．三七总皂甙对大鼠肝纤维化防治机制ｍ．　世界华人消化杂志，２００４，１２（８）：１９３９　基化而导致肝细胞坏死，进而形成纤维化。　肝纤维化是细胞外基质合成与降解失调的结　果，胶原是细胞外基质（ＥＣＭ）的主要组成部分．即肝　纤维化的发生与胶原合成、降解的动态平衡失调有　关，肝纤维化主要表现为大量ＥＣＭ异常沉积、纤维　隔形成、肝细胞弥漫性变性、坏死和结节状再生［９１。　Ｈｙｐ是胶原蛋白的主要成分。其它蛋白质几乎不含　Ｈｙｐ，在纤维化过程中，肝组织中Ｈｙｐ随着胶原的　消长而变化，是评估胶原蛋白含量和肝纤维化程度　的指标：血清中ＨＡ、ＬＮ和ＩＶ胶原含量的变化．也　同样被证明是判断肝纤维化程度极具实用价值的　指标。　脂质过氧化是机体内自由基对细胞膜成分磷脂　中的多不饱和脂肪酸攻击的中间产物．可以启动细　［２］乔成栋，张彩云，郭小冬，等．复方丹参滴丸抗大鼠肝纤维化的　实验研究　．兰州大学学报（医学版），２００７，３３（１）：１４　［３］邓秀兰，王青青，张晓晶，等．甘草次酸配伍丹参酮防治大鼠免　疫性肝纤维化的作用机制『Ｊ】．中国药师，２００７，１０（８）：７４１　［４］徐叔云，卞如濂，陈修．药理实验方法学［ＭＩ．北京人民卫生出版　社，２００１：１３５０—１３５１　［５］中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会．病毒性肝　炎防治方案　．中华肝脏病杂志，２０００，８（６１：３２４　［６］Ｓｅｈｅｕｅｒ　ＰＪ．Ｃｌａｓｓｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｖｉｒａｌ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ：ａ　ｎｅｅｄ　ｆｏｒ　ｒｅ—　ｓｓｅｓｓｍｅｎｔａ［Ｊ］．ＪＨｅｐａｔｏｌ，１９９１，１３：３７２　［７］刘成，徐光福，陆雄，等．二甲基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化过程　中Ｏｔ平滑肌肌动蛋白与门脉压力的变化们．中国中西医结合消　化杂志，２００２，１０（５）：２７１　［８］刘永刚，谢少玲，李芳君．姜黄素对ＤＭＮ诱导的大鼠肝纤维化　形成的影响Ｌ刀．中药材，２００５，２８（１２）：１０９４　胞损伤过程。本实验观察了模型大鼠ＳＯＤ和ＭＤＡ　的变化以及药物的影响，结果发现三参提取物能够　显著地降低大鼠肝组织中ＭＤＡ的含量．说明该药有　降低自由基生成和减少脂质过氧化的作用。　［９］刘成海，李风华，熊卫国，等．脂质过氧化在二甲基亚硝胺诱导的　大鼠肝纤维化中的作用们．世界华人消化杂志，２００１，９（６）：６４５　（２００７—１２—１８收稿）　本刊加入“万方数据——数字化期刊群＂的声明　为了实现科技期刊编辑、出版发行工作的电子化，推进科技信息交流的网络化进程，我刊现已入　网“万方数据——数字化期刊群”，所以，向本刊投稿并录用的稿件，将一律由编辑部统一纳入“万方数　据——数字化期刊群”。进入因特网提供信息服务。凡有不同意者。请提前声明。本刊所付稿酬包含刊　物内容上网服务报酬。不再另付。　“万方数据——数字化期刊群”是国家“九五”重点科技攻关项目。本刊全文内容按照统一格式制　作．读者可上网查询浏览本刊内容．并征订本刊。　（编辑部）