稻曲病接种菌源及接种方法的研究

１９９６年　第ｌ期　辽宁农业科学　・３３・　观察者不易识别个体间的遗传差异。　越大；选育世代数越多，遗传越稳定．变异额　３．４　在选育世代相同的条件下．杂交亲本　率越小。　亲缘关系越远，杂交亲本越多，所选育的新品　３．ｅ　水稻新品种（系）育成以后，庄不断地　系遗传越不稳定，变异频率也就越大　进行系选提纯，以提高其群体基因纯台性钾　３．５　在亲本杂交类型相同的条件下，新品　遗传稳定性，提高或保持其优良的砷性。　系选育世代数越步遗传越不稳定，变异频率　Ｉ　５　ｔ叶　稻曲病接种菌源及接种方法的研究　王疏白元俊刘晓舟朱茂山　郭晓波　克平　（辽宁省农科院檀保所）　（辽宁省高山子劳改支队）　提要试验筛选出两种致病力较强的接种菌源，稻曲病菌在ＰＤ、Ｐｓ两种培养液　中分生孢子产生量可达ｌ０　个／毫升以上，用适温高温可以郭分地打琏老热辱垣袍子　体眠。苯试骚首次进行了稻曲病菌白化茁椿的分离、培券研究，甩培养的白化菌埠盎　水稻孕穗期接种成功。在相同条件下，注射接种成功率嚼显高于喷雾接种。接种君的　相对低温处理有利干病害发生　作者认为接种菌源与接种詹的温度是人Ｉ接种成砖　的关键因子　荚潼词　童菌　接种方法　？　哇｝稻曲　菌（　“　ｇ飙０　ｅｄ　∞ｓ　Ｃｋｅ．　１材料与方法　Ｔａｋ）引起的农稻稻曲病的发现已有ｌＯ０多　年的历史。近年来，由于高产品种的推广和施　１．１　接种菌源培养方法　肥量的增加，使我国水稻产区的稻曲病逐年　１．１．ｉ　稻曲病菌分生孢子的培养　制　加重　水稻稻曲病已经成为影响水稻产量和　做ＰＤ　ＰＳ、ＹＰＰＤ、ＰＷ四种培养基。取２０个　质量的主要病害。国内外学者已经对稻曲病　１５０毫升的三角瓶，每５个三角瓶为一十处　做了大量的研究工怍，但对痛害的初侵来源，　理，共　个处理。在每个处理中的每个三角瓶　侵染时期，侵染途经等同题仍不十分明确。这　中分别倒入上述培养液１００毫升，然后定量　些问题已经成为研究和解释稻曲病发生机理　地接＾稻曲病菌＝代菌种，在２６ｃ瞧耐条件　的障碍。稻曲病人工接种研究是解决上述疑　下培器７天后定量地注入到固体平扳培养基　难问题的重要途径。接种苗源及人工接种方　（ＰＤＡ）上，在２６℃黑暗条件下培养，每　２　法的研究是稻曲病人工接种研究中的关键技　小时显微镜Ｆ检查一次。检查方｛砉：把所需要　术。本试验对　同菌源的致病力及不同接种　检查的平板菌液用玻璃棒搅匀，经纱布过滤　方法接种的发病情况进行了较系统的研究，　后，用量简量出ｌ～２毫升，在显微镜下用血　井取得了一定的进展。　球计数扳计数，再换算出每毫升分生孢子敷　１．　．２　打破体眠的老熟厚垣孢子作为接　÷收穑日期ｔｌ９９５一盯一２４　维普资讯 http://www.cqvip.com

・３４・　辽宁农业科学　１９９６年　第１期　种菌源将贮存５～９个月的成熟的稻曲球　数颗放在盛有自来水的培养皿中，在２６℃黑　暗条件下培养，经常加水保持高湿，随时检　查。去掉发霉的稻曲球　１．１．３　稽曲病菌白化菌株的培养把在　田问采集的白化稻曲病菌（这种菌株在国内　首次发现）。用常规分离方法把该菌分离出　来，把此菌株接在ＰＤＡ斜面上，在２６℃条件　下培养２个月左右，转接在ＰＤＡ液体培养基　中，在２６℃条件下培养。　１．１．４　稽曲病菌老熟厚垣袍子作为接种　茵源把在田间采集的水稻稻曲球放在室内　条件下自然处理。按种前，取稻曲球表面的厚　垣孢子，用蒸馏水配成孢子悬浮液。用常规方　法做萌发试验。　１，ｌ。５　稻曲病菌黄色厚垣袍子萌发试骚　在早熟水糖田中采集新发病的黄色稻曲　球，取其上的黄色厚垣孢子作萌发试验。　１．１．６　利用福曲病菌的茵丝段作为接种　菌源把二代稻曲病菌转接在ＰＤＡ平板上，　培养２个月后，用刀片划成数条，加入燕馏　水，用玻片刮取培养基表面的菌墼，经纱布过　滤后配成菌丝液，作为接种菌源。　１、２接种方法的研究　、盆栽感瘸品种兴粳２号，每盆３穴，定期　施肥，在水稻孕穗期使水稻叶色指数选４缎　以上。　１・２．１　喷雾接种法做６种接种菌源及　１个清水对照，共７个处理＋在水稻孕穗期，　大部分植株顶叶与次顶叶间距为２～１　Ｏ厘米　时。进行喷雾接种，每处理６０株以上，接种后　的稻盆分别放在１６℃。２０＂Ｃ，２５℃的　同温　度条件下处理２天，再在２６℃条件下保湿处　’理３天，然后放回阳问＋每天喷雾６次保湿，　３Ｄ天后调查发病情况，计算接种发病率。　１．２．２注射接种法“　做６种苗源及一　个清水对照，共７个处理，在水稻孕穗期，大　帮分植株顶叶与跃顶叶叶耳间距为２～１０厘　米时，注射到稻株孕穗的苞内．每株注射量为　ｉ～２毫升（直到苞内充满茵液为＿上ｌ）＋每处理　６０株以上。接种后稻盆放在１　６℃，２０Ｃ，２５℃　不同温度条件下处理２天。在２６℃条件下保　湿处理３天，再移至田闻，每天喷雾６次保　湿，３Ｏ天后调查接种与发病情况，计算接种　发病率　２结果与分析　２。１接种菌源培养方法　２．１．１　稻曲病菌分生孢子的培养培养　试验显示出，在平板培养１４４小时时，在ＰＤ、　Ｐｓ培养基中的分生孢子产生数量达１　个／　毫升　上。其它培养液中分生孢子数量少于　１０＇个／毫升，因此。接种时选用ｐｓ或ＰＤ培　养液产生的分生孢子液作为接种菌液。　２．１－２　打破休眠的老熟厚垣孢子作为接　种菌源试验结果表明，高湿处理的筇５天　时，稻曲球表面开始变得琉橙并开裂。在处理　２０天时取稻曲球表面厚垣孢子，在２Ｉｊ℃条件　下进行萌发试验。每５天做一次。萌发试验结　果表明，高湿处理后的厚垣孢子从２０天起开　始萌发，一直可持续２０￣５０天。这种处理可　使老熟的厚垣孢子萌发率达２０　以｝ｌ＿把逮　种打破休眠的厚垣孢子用蒸馏水配成厚垣孢　子悬浮液，作为接种菌液　２．１．３　藉曲病菌白化菌株的培算试验　表明，稻曲病菌白化菌株在培养２３天对，在　培养液内部有分生孢子产生，但数量很少（它　与正常稻曲病菌产生的分生孢子形态不同）。　在培养５５夭以后，在培养液表面的菌落中有　白色厚垣孢子产生，用纱布过滤该茁蒗后，用　分生孢子及白色厚垣孢子混台液作为按种茵　液。　２．１．４　稽曲病茵老熟的厚垣袍子作为接　种菌源用常规方法作萌发试验，结栗表明ｔ　老熟的厚垣孢子萌发率接近于零。把遗种厚　垣孢子配成孢子悬浮液作为接种茁源。　２．１．５　稽曲病菌黄色厚垣袍子萌　殳试鞋　萌发试验表明，这种在田间采集　斫鲜黄　色厚垣孢子萌发率在９０　以上。把遗种厚垣　孢子配成孢子悬浮液作为接种菌源。　维普资讯 http://www.cqvip.com

１　９９６年　第ｌ期　辽宁农业科学　・３５・　２．２接种方法　２．２．１　喷霉接种法利用喷雾法在水稻　孕穗期接种的发病情况见表ｌ。　表１喷雾接种稻曲病的发病情况　发崭暮率（％）　苗　源　１６＂Ｃ　２０℃　２５℃　注：没接种的稻盆作为空白对ＪＩ曩，下同ｔ　从表ｌ可以看出，利用稻曲病菌分生孢　子、打破休眠的厚垣孢子、厚垣孢子、白化菌　株接种，接种后放在１６℃，２ｔ｝＇Ｃ，２５℃条件　下，均可　ｆ起发病。基中分生孢子，打破休眠　的厚垣孢子，厚垣孢子作为菌源接种发病穗　率在ｌ０　以一ｋ。黄色厚垣孢子，菌丝段接种　发病率与对照基本相同。接种后的不同温度　处理中以１　６＂Ｃ条件下发病率较高，这说明接　种后低温处理有利于病害的发生。　２．２　２　注射接种法利用注射接种法，　在水稻孕穗期接种发病情况见表２　表２注射接种稻曲病的发生情况　裳搏　Ｉ率（　）　蕾　源　Ｊ　ｒ　２ｏｒ　２５譬　从表２可以看出，利用稻曲瘸病菌分生　孢子、打破体眠的厚垣孢子、厚垣孢子、白化　菌株作　暂接种苗源在水稻孕穗期注射接种均　可以引起发病，其中以分生孢子作为菌源接　种穗发病率最高为ｄ７　。打破休眠的厚垣孢　子次之．接种后不同温度处理的结果与喷雾　接种法试验相同，这进一步说明了接种后相　对低温处理有利于病害发生　３讨论　水稻稻曲病人工接种一直是水稻稻曲病　研究课题中的一个难题。接种苗源筛选和接　种方法的研究是稻曲病研究中一项较重要的　研究技术。　３．１　试验筛选出产生分生孢子量较大的　液体培养基ＰＤ、Ｐｓ，产孢量达ｌ　］－／毫升以　上。　３．２　利用长期适温高湿方法可打破稻曲　病菌老熟厚垣孢子的休眠，使老熟厚垣孢了　萌发率达２０　以上。　３．３　本试验首次分离、培养稻曲病菌白化　菌株（稻曲病菌突变株）并在水稻孕穗期涸接　成功，这项研究至今还未见报遭。　３．４　通过人工接种筛选出分生孢子，打破　休眠的老熟厚垣孢子二种具有较强致病能力　的接种菌源。　３．５　试验利用藏体培养产生的分生孢予　在水稻孕穗期进行注射接种，接种成功率可　达ｄ７　。　３．６　由不同接种方法试验可以看出，利用　注射接种法，接种穗发病率明显高于喷雾接　种法　３．７　通过接种苗源，接种后不同温皮处理　试验可以看出，温度及接种苗源是人工接种　成功的关键圈子　此项研究目前还在进行中，　目前的接种成功率还不够理想，不厨目源的　致病力比较，最佳的接种方法，接种条件和接　种落源还有待于进一步研究。　参考文献　（１　藤田佳克尊　稆　６匕病菌分生孢于　４丰稿　干期接种，日檀病报－ｌ９８９，５５－６２９～６３｜　２　王疏等　稆曲病菌抱子形成的培葬技ｌ术卧工接种　研究，辽宁粳业科学，】９９２（５）ｔ３ｓ～卵．