中药葛根提取工艺研究

维普资讯 http://www.cqvip.com 制剂技术　中药葛根提取工艺研究　刘敏彦，董超，高秀强，秦拢，许红辉，王玉峰，李晓燕　０５００３５）　（河北以岭医药研究院有限公司，河北石家庄２００８年第ｌ７卷第３期　摘要：目的优选葛根的提取工艺。方法采用单因素考察及正交试验设计，以葛根素含量为考察指标。结果选定的工艺为加９倍量７０％　乙醇，提取２次，第１次２　ｈ，第２次１．５　ｈｏ结论用选定的工艺，葛根素提取效率高，结果稳定。　关键词：葛根；葛根素；单因素考察；正交设计；提取工艺　中图分类号：ＴＱ４６１；Ｒ２８２．７１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６—４９３１（２００８）０３—００２４—０２　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ　Ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　Ｒａｄｉｘ　Ｐｕｅｒａｒｉａｅ　Ｌｉｕ　Ｍｉｎｙａｎ，Ｄｏｎｇ　Ｃｈａｏ，Ｇａｏ　Ｘｉｕｑｉａｎｇ，Ｑｉｎ　Ｌｏｎｇ，Ｘｕ　Ｈｏｎｇｈｕｉ，Ｗａｎｇ　Ｙｕｆｅｎｇ，Ｌｉ　Ｘｉａｏｙａｎ　（Ｈｅｂｅｉ　Ｙｉｌｉｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ，ｔｔｅｂｅｉ。Ｃｈｉｎａ　０５００３５）　Ａｌ￣ｔｒａｅｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｆｏｒ　ｒａｄｉｘ　ｐｕｅｒａｒｉａｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｔｅｓｔ　ａｎｄ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｄｅｓｉｇｎ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｐｕｅｒａｒｉｎ　ａｓ　ｔｈｅ　ｉｎｄｅｘ　ｏｆ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｄｉｘ　Ｄｕｅｒａｒｉａｅ　ｗａｓ　ａｄｄｉｎｇ　９　ｔｉｍｅｓ　ｏｆ　７０％ａｌｃｏｈｏｌ，ｒｅｌｕｘｉｎｇ　ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｆｏｒ　２　ｈ　ａｔ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　１５　ｈ　ａｔ　ｔｈｅ　ｓｅｃｏｎｄ　ｔｉｍｅ，ｔｏｔａｌｌｙ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　．ｔｗｉｃｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｉｓ　ｅｆｉｃｉｆｅｎｔ　ａｎｄ　ｓｔａｂｌｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｒａｄｉｘ　ｐｕｅｒａｒｉａｅ；ｐｕｅｒａｒｉｎ；ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｔｅｓｔ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｄｅｓｉｇｎ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　葛根为豆科植物野葛Ｐｕｅｒａｒｉａｅ　ｌｏｂａｔⅡ（Ｗｉｌｌｄ．）Ｏｈｗｉ的干燥根Ｉ－－，　习称野葛，性味辛、甘、凉，归脾、胃经，具有解肌退热、透发麻疹、生　津止渴、升阳止泻的功效Ｉ　。葛根中主要含异黄酮类化合物（葛根　素、大豆素、大豆苷等），其总黄酮具有扩张冠状动脉、增加冠状动　脉血流量及降低心肌耗氧量等作用１３】。葛根为治疗糖尿病的常选　于以水和其他质量分数的乙醇作溶剂时提取的葛根素含量，故选　７０％乙醇为提取溶剂。　２．３　提取工艺正交试验　以影响提取物收率的提取次数（因素Ａ）、提取时间（因素Ｂ）、　溶剂倍数（因素Ｃ）为考察因素，以葛根素含量为指标进行试验。取　药材，净选，干燥，粗碎，按处方配比，称取葛根３０　ｇ，以７０％乙醇为　提取溶剂。在平行操作条件下，按Ｌ９（３　）正交表安排，回流提取，提　取液过滤、合并、浓缩，加７０％乙醇定容至１　０００　ｍＬ，备用。因素水　平见表１，正交试验结果及方差分析结果见表２、表３。由表２可知，　中药，古代很多本草著作中早有记载。本院研发的降糖中成药中的　一味主药即为葛根，为了充分提取其有效成分，笔者采用单因素考　生产的提取工艺。　察及正交试验设计，对葛根的提取工艺进行了研究，确定了适合大　１　仪器与试药　回流提取装置；高效液相色谱仪（Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００）。葛根药材（安　３个因素的影响从大到小依序为提取次数、提取时间、加醇量，最佳　工艺为ＡｓＢｓＣｓ，即加１１倍量７０％乙醇，提取３次，每次２　ｈ。方差分　国以岭中药饮片有限公司）；葛根素对照品（批号为７５３—２００００７，　中国药品生物制品检定所）；乙醇（医用级），甲醇（色谱纯），水（重　蒸水）。　２　方法与结果　２．１　葛根素含量测定方法　析表明，因素Ａ对葛根素的含量有显著性影响（Ｐ＜０．０５），因素Ｂ　和因素Ｃ对葛根素的　响。因素Ａ中，随着提　表１　因素水平表　含量均无显著性影　水平因素Ａ（次）因素Ｂ（ｈ）因素ｃ（倍）因素Ｄ（空白）　取次数的增加，葛根　素的含量虽有不同程　表２　葛根提取工艺正交试验结果　编号　因素Ａ（次）因素Ｂ（ｈ）因素ｃ（倍）因素Ｄ（空白）　含量　溶液配制：精密称取葛根素对照品１０　ｍｇ，置２５　ｍＬ量瓶中，加　３０％乙醇至刻度，摇匀，精密吸取２　ｍＬ，置１０　ｍＬ量瓶中，加３０％　乙醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液。精密吸取样品５　ｍＬ，分别置　２５　ｍＬ量瓶中，加３０％乙醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜（０．４５　ｍ）　滤过，即得供试品溶液。　色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流　动相为甲醇一水（２５：７５），检测波长为２５０　ｎｍ，柱温为２５℃，流速　为１　ｍＬ／ｍｉｎ。　测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各１０　Ｌ，注　入液相色谱仪，测定，即可。　２．２提取溶剂考察　参考文献【４—５１介绍的葛根提取工艺，选取水、３０％乙醇、　４０％乙醇、５０％乙醇、６０％乙醇、７０％乙醇、８０％乙醇为单因素考察　水平，进行试验。取葛根药材，净选，干燥，碎成５　ｍｍ左右大小的颗　粒，称取３０　ｇ，在平行操作条件下，加１０倍量溶剂，加热回流提取　２次，每次２　ｈ，提取液过滤，加各自溶剂定容至１　０００　ｍＬ，备用。结　果以水及３０％，４０％，５０％，６０％，７０％，８０％的乙醇为提取溶剂时，　每３０　ｇ提取液中分别含葛根素２３．４７，２４．５７，２５．２５，２６．１０，２７．０８，　２７．６２，２６．０５　ｍｇ。可见，用７０％乙醇作溶剂时，葛根素含量明显高　・注：表中含量是指每３０　ｇ葛根含葛根素的质量，表４同。　２４・　维普资讯 http://www.cqvip.com ２００８年第ｌ７卷第３期　正交法优选丹皮炭炮制工艺木　张虹，丁安伟，张丽　（南京中医药大学，江苏南京　２１００４６）　制剂技术　摘要：目的采用正交试验法，以鞣质含量为指标，对丹皮炭不同炮制方法进行优选。方法采用分光光度法，对不同工艺的炮制品中鞣质含　量进行测定。结果丹皮炭炮制的最佳工艺条件是２５０℃、加热５　ｍｉｎ。结论验证试验表明。所选的最佳炮制工艺较为合理。　关ｔ词：丹皮炭；正交试验设计；鞣质　中图分类号：ＴＱ４６１；Ｒ２８２．７１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６—４９３１（２ＯＯ８）０３—００２５—０２　Ｏｐｔｉｍａｌ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ｏｆ　Ｃａｒｂｏｎｉｚｅｄ　Ｐａｅｏｎｉａ　Ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａ　Ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｂｙ　Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　Ｚｈａｎｇ　ｌｔｏｎｇ，Ｄｉｎｇ　Ａｎｗｅｉ，Ｚｈａｎｇ　Ｌｉ　ｆ　Ｎａａｊｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｅ，Ｎａ　ｎｇ，Ｊｉｎａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ　２１００４６）　Ａｂｓｔｒａｃｔ，：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｃｒｅｅｎ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ｉｎ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｃａｒｂｏｎｉｚｅｄ　Ｐａｅｏｎｉａ　ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａ　ｂｙ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｄｅｓｉｇｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｍｅａｓｕｒｅ　ｔｈｅ　ｔａｎｎｉｃ　ｃａｒｂｏｎｉｚｅｄ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｃａｒｂｏｎｉｚｅｄ　Ｐａｅｏｎｉａ　ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｉｎ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｒｂｏｎｉｚｅｄ　Ｐａｅｏｎｉａ　ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａ　ｗａｓ　２５０。Ｃ，ｈｅａｔｉｎｇ　ｆｏｒ　５　ｍｉｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｒｅｐｅａｔ　ｔｅｓｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｉｓ　ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ．　Ｋ　ｗｏｒｄｓ：ｃａｒｂｏｎｉｚｅｄ　Ｐａｅｏｎｉａ　ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｄｅｓｉｇｎ；ｔａｎｎｉｎ　牡丹皮系毛茛科植物牡丹Ｐａｅｏｎｉａ　ｓｕｆｒｕｔｉｃｏｓａ　Ａｎｄｒ．的干燥　根皮，具有清热凉血、活血化瘀作用，用于温毒发斑、吐血、夜热早　２．１正交试验设计　牡丹皮炒炭工艺的影响因素有锅的品质（如铁锅、铜锅及铝　锅）、炒制温度与炒制时间。在试验设计时考虑到牡丹皮炒炭的传　统工艺中常用铁锅，而铁元素对人体影响较小，又适合工厂生产，　且成本较低，故确定锅的品质为铁锅。故以炒制温度（因素Ａ）与炒　制时间（因素Ｂ）为考察因素，每个因素取３个水平，选用　（３　）正交　表安排试验（见表１）。药材投药量为５０　ｇ，铁锅炒制，以红外测温仪　测量温度，电子节能控温仪自动控制温度，按表１，９（３　）安排进行试　验，共炒制得９份丹皮炭样品，待用。　表１丹皮炭炮制的因素及水平　ｌ～９号样品均为厚约１．５　ｍｍ的不　规则片状，颜色见表２。　２　２含量测定　２．２．１　溶液制备　凉、无汗骨蒸、经闭痛经、痈肿疮毒、跌扑伤痛“１，其化学成分主要　为单萜类、丹皮酚类、鞣质类、三萜类化合物。牡丹皮炒炭后具有止　血的作用，但目前对其止血机理尚不明确，因鞣质具有收敛止血的　作用，故采用鞣质　作为考察指标来筛选丹皮炭的最佳工艺。　１　仪器与试药　ＡＺ一８６６８型红外线测温仪（上海中炫电子有限公司），电磁　炉，ＦＡ一１００４型电子分析天平（上海天平仪器厂）；ＵＶ一２４０１型紫　外可见分光光度计（日本岛津），７５２型紫外分光光度计（上海光谱　仪器有限公司）。牡丹皮药材（安徽毫州中药材市场，经南京中医药　大学吴启南教授鉴定为毛茛科植物牡丹Ｐａｅｏｎｉａ　ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａ　Ａｎｄｒ．　的干燥根皮）。没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为　ｌ１０８３ｌ一２００３０２）；干酪素为生化试剂；其余试剂为分析纯。　２　方法与结果　｝国家“十一五”科技支撑项目，项目编号：２００６ＢＡＩＯ９ＢＯ０６—０２。　精密称取没食子酸１０　ｍｇ，置２５０　ｍＬ棕色量瓶中，加水溶解并　稀释至刻度，摇匀，即得每ｌ　ｍＬ含没食子酸０．０５０　８　ｍｇ的对照品溶　●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●ｌ●●●●●●●●●●●●●●●●●●●ｌ●●●●●●●●●●●●●●●●●●●ｌ●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●　度的增加，但水平２到水平３　表３方差分析结果　定工艺Ａ　Ｂ｛　）ｃ　的差距均不大；但选定工艺省工节能。　３　讨论　增幅变小，为了缩短生产周期，　方差来源离均差平方和自由度均方　值显著性　故只提取２次。因素Ｂ对葛根　素的含量无显著性影响，但考　虑到浸提时溶剂对药材组织的　葛根所含黄酮类成分易溶于乙醇，通过考察，发现此类成分在　７０％乙醇中溶解度较大；对采用正交试验设计得出的最佳提取工　艺，结合实际大生产进行了优化，最终确定葛根的提取工艺为加９　倍量７０％乙醇提取２次，第１次提取２　ｈ，第２次提取１．５　ｈ。　浸润和渗透过程，将提取时间　选为第１次２　ｈ，第２次１．５　ｈ。　因素Ｃ对葛根素的含量亦无显著性影响，考虑到药材提取的吸收　注：Ｆｏ∞Ｉ２．２）＝１９．００，Ｆｏ　０１（２．２）＝９９．００。　作者简介：刘敏彦（１９７５一），女，硕士，主要从事中药新药的研　发（电子信箱）Ｌｉｕｍｉｎｙａｎ７５＠１６３．ｃｏｍ。　参考文献：　【１】国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）【Ｍ】．北京：化学工业出　版社．２００５：２３３．　溶剂膨胀，将用量定为９倍量。最后优选确定的工艺为Ａｚ　Ｂ｛　）ｃｚ，　即加９倍量７０％乙醇提取２次，第１次２　ｈ，第２次１．５　ｈ。　２．４　验证试验　取药材，净选干燥，粗碎，　称取葛根３０ｇ，以７０％乙醇为提　取溶剂，按最佳工艺Ａ，Ｂ，Ｃ，组　合条件和选定工艺ＡｚＢ（３．ｚ）Ｃｚ　的组合条件进行重复验证对比　试验，测定葛根素的含量，结果　见表４。以葛根素的含量为考　察指标，最佳工艺Ａ，Ｂ，Ｃ，和选　表４验证试验结果　【２】高学敏．中药学（上册）【Ｍ】．北京：人民卫生出版社，１９９８：２７３．　【３】肖培根．新编中药志（第一卷）【Ｍ】．北京：化学工业出版社，２００１：　９６２—９７４．　【４】王美东，李常行，孙钦美．葛根提取工艺的正交设计试验【Ｊ】．齐鲁药　事，２００５，２４（１）：４５—４６．　【５】白海波，李　波，宋子荣．葛根提取工艺研究【Ｊ】．中国实验方剂学杂　志，２００２，８（６）：１４—１５，　（收稿日期：２００７—０７—２０）　・２５・