分离分析

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高效液相色谱法测定柴胡颗粒中黄芩苷含量

【作者】【摘要】综述了高效液相色谱法在柴胡颗粒中黄芩苷含量测定的方法。方法采用超声法提取柴胡颗粒中黄芩苷,用高效液相色谱法测定其含量。【关键词】高效液相色谱;柴胡颗粒;黄芩苷【正文】

高效液相色谱（HPLC）是在经典液相色谱法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的.

学生阅读了高效液相色谱法在柴胡颗粒中黄芩苷含量测定的方法。发现了它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相，不过最令学生惊叹的是其分析速度快。

柴胡颗粒制剂是由柴胡、姜半夏、黄芩、党参、干草、生姜、大枣等组成的复方制剂,具有解表散热、疏肝和胃功能,用于寒热往来、胸胁苦满、心烦喜吐、口苦咽干等症状。

学生查找了一篇文献，文献中黄芩为君药,其主要成分为黄芩苷,为了更好地控制该药的生产质量,文献中提出了高效液相色谱法测定柴胡颗粒中黄芩苷含量的方法［1］,结果表明,该方法简便,灵敏度高,重现性好。以下是学生自文献中摘录的相关信息:

1仪器与试剂：

1.1仪器：大连依利特高效液相色谱仪,LIV230+紫外-可见检测器,EC2000色谱数据处理系统。

1.2试剂：黄芩苷标准品（中国药品生物制品检定所）;柴胡颗粒（昆明云健制药有限公司提供）;甲醇为色谱纯,水为双蒸水,其他试药均为分析纯。

2方法与结果：

2.1色谱条件色谱柱:HypersilODS2柱（5μm,250mm×4.6mm）;流动相:甲醇:水:磷酸=47:53:0.2,柱温:25℃;流速:1.0ml/min;进样量10μl;理论踏板数按黄芩苷计不低于3000。在此条件下,黄芩苷能与其他组分达到基线分离。

2.2标准品溶液制备精密称取黄芩苷对照品适量,加70%的甲醇溶解制成每毫升含50μg的溶液。

2.3供试品溶液的制备精密量取柴胡颗粒制剂2.3g（含黄芩苷5mg）,置100ml容量瓶中,加入70%甲醇约50ml,超声30min,静置放冷。用70%甲醇定容至100ml,摇匀,经滤器过滤,取续滤液作为供试品液;另按处方工艺制备不含黄芩的阴性样品,按样品液制备方法制成阴性样品溶液［2］。

2.4干扰性试验分别取黄芩苷对照品溶液、样品溶液和阴性对照溶液，各进样10μl测定。

2.5结果表明阴性对照品未呈现与对照品保留时间相同的色谱峰,对测定无干扰。

3讨论：

3.1供试品溶液的制备有研究曾采用以碱水提取,酸化后以乙酸乙酯萃取,挥干溶剂,加定量甲醇溶解后进样的方法进行测定,但处理过程繁琐。柴胡颗粒的主辅料为蔗糖,以甲醇为溶剂,经超声法提取,提取液颜色较浅,经滤过后可直接进样。

3.2测量方法的选择中成药中黄芩苷的测定方法很多,如分光光度法、薄层扫描法、二阶导数光谱法等。高效液相色谱法以其速度快、方法简便、准确性高、重现性好、分离效果好等优点,更适合制剂中黄芩苷含量测定。

3.3流动相的选择不同文献对多种类型和不同比例的流动相进行了反复的实验比较，结果表明：以甲醇:水:磷酸=45:55:0.2为流动相，保留时间长，柱效较高，分离效果佳。

综上，学生发现，使用高效液相色谱时,液体待检测物被注入色谱柱,通过压力在固定相中移动,由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同,不同的物质顺序离开色谱柱,通过检测器得到不同的峰信号,最后通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质.高效液相色谱作为一种重要的分析方法,广泛的应用于化学和生化分析中.高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别,它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相,适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物.

【参考文献】

1王凯祥,陈圆晰.高效液相色谱法测定小柴胡冲剂中黄芩昔含量.中国现代应用药学,1999,16（2）:47.

2王薇,覃贝.高效液相色谱法测定芩连颗粒中黄芩苷的含量.中国药物与临床,2008,8:662-663.