移植复苏后进一步卵裂胚胎可提高冻融胚胎移植临床妊娠率

现代医院２０１２年７月第１２卷第７期专业技术篇Ｍｏｄｅｍ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　Ｊｕｌ　２０１２　Ｖｏｌ　１２　Ｎｏ　７　移植复苏后进一步卵裂胚胎可提高冻融胚胎移植临　床妊娠率　龚绍琼　ＣＲＹＯＰＲＥＳＥＲＶＥＤ　ＨＵＭＡＮ　ＥＭＢＲＹＯＳ　ＷＩＴＨ　ＦＵＲＴＨＥＲ　ＣＬＥＡＶＡＧＥ　ＡＦＴＥＲ　ＴＨＡＷＩＮＧ　ＩＮ－　ＣＲＥＡＳＥＳ　ＣＬｌＮＩＣＡＬ　ＯＵＴＣＯＭＥ　ＯＦ　ＦＥＴ　ＣＹＣＬＥＳ　ＧＯＮＧ　Ｓｈａｏｑｉｏｎｇ　【摘要】　目的探讨复苏后胚胎进一步卵裂情况对冻融胚胎移植妊娠结局的影响。方法对２０１０年６月～２０１１年　１２月问我院生殖中心行的１９１例ＦＥＴ周期进行回顾性分析：于移植前一天下午解冻胚胎，过夜培养，观察卵裂球进一步卵裂　情况，然后按每一例ＦＥＴ所移植胚胎的进一步最多卵裂个数（ｎ一，即该患者所移植胚胎中进一步卵裂胚胎数为该数目）分　为Ａ组（ｎ一：０，ｎ＝３１）、Ｂ组（ｎ　＝１。ｎ＝５８），Ｃ组（ｎ一＝２，ｎ＝６９），Ｄ组（ｎ　＝３，ｎ＝３３），观察不同卵裂球进一步卵裂情　况对临床妊娠结局的影响。结果各组临床妊娠率分别为：Ａ组２９．Ｏ％（９／３１），Ｂ组３５．６％（２１／５８），Ｃ组４０．６％（２８／６９），　Ｄ组４５．５％（１５／３３），两两比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论冻融胚胎移植提前解冻培养、选择进一步卵裂的胚胎　进行移植有助于提高ＦＥＴ周期临床妊娠率。　【关键词】　冻融胚胎移植提前解冻进一步卵裂发育潜能临床妊娠率　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｉｆｖｅ　Ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ　ｅｍｂｒｙｏｓ　ｗｉｔｈ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｃｌｅａｖａｇｅ　ａｆｔｅｒ　ｔｈａｗｉｎｇ　ｏｎ　ｃｌｉｎｉｃｌａ　ｏｕｔ—　ｃｏｍｅｓ　ｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇ　ｆｒｏｚｅｎ　ｅｍｂｒｙｏ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｃｙｃｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ａ　ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ　ｓｔｕｄｙ　ｗａｓ　ｐｍｇｒａｍｍｅｄ　ｉｎ　ｏｕｒ　ｃｅｎｔｅｒ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　１９１　ＦＥＴ　ｃｙｃｌｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｊｕｎｅ　２０１０　ｔｏ　Ｏｃｔｏｂｅｒ　２０１　１．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｍａｘｉｍａｌ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｂｌａｓｔｏｍｅｒｅ　ｃｏｕｎｔｓ　ａｆｔｅｒ　ｔｈａｗｉｎｇ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｐａｔｉｅｎｔ：ｇｒｏｕｐ　Ａ（ｎ…＝０，ｎ＝３１）、ｇｒｏｕｐ　Ｂ（ｎ　＝１，ｎ＝５８）、ｇｒｏｕｐ　Ｃ（ｎ　＝２，ｎ＝６９）ａｎｄ　ｇｒｏｕｐ　Ｄ（ｎ～：３，ｎ＝３３）．　Ｅａｃｈ　ｐａｔｉｅｎｔ　Ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｆｏｒ　ｏｏｃｙｔｅ　ｙｉｅｌｄ，２ＰＮ　ｒａｔｅ，ｃｌｅａｖａｇｅ　２ＰＮ　ｅｍｂｒｙｏｓ，ｈｉｇｈ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｅｍｂｒｙｏｓ，ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｐｒｅｇｎａｎｃｙ　ｒａｔｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ａｍｏｎｇ　ｇｒｏｕｐｓ［２９．Ｏ％（９／３１），３５．６％（２１／５８），４０．６％（２８／６９）ａｎｄ　４５．５％（１５／３３）ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ａ，Ｂ，Ｃ　ａｎｄ　Ｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，Ｐ＜０．０５】．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ　ｅｍｂｒｙｏｓ　ｗｉｈｔ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｃｌｅａｖａｇｅ　ａｆｔｅｒ　ｔｈａｗｉｎｇ　ｉｎｃｒｅａｓｅｓ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｏｕｔｃｏｍｅ　ｏｆ　ＦＥＴ　ｃｙｃｌｅｓ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】　Ｃｌｅａｖａｇｅ，Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ　ｅｂｍｒｙｏｓ，Ｆｒｏｚｅｎ　ｅｂｍｒｙｏ　ｔｒｎａｓｆｅｒ，Ｃｌｉｎｉｃｌａ　ｏｕｔｃｏｍｅ　【Ａｕｔｈｏｒ　Ｓ　ａｄｄｒｅｓｓ】Ｓｈａｏｇｕａｎ　Ｍａｔｅｍｉｔｙ　ｎａｄ　Ｃｈｉｌｄ　Ｃａｒｅ　Ｈｏｓｐｉｔｌａ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　５１２０２６，ＰＲＣ　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｉ．ｉｓｓｎ．１６７１—３３２Ｘ．２０１２．０７．００５　控制性促排卵往往伴随多卵泡发育，从而使辅助生殖技术　岁；②高ＰＲＬ血症；③先天性子宫畸形；④既往有子宫手术史；⑤　一次采卵、多次移植，提高累积妊娠率。在取卵周期新鲜移植未　超过３次ＩＶＦ／ＩＣＳＩ治疗周期。　获活产、仍有保存冷冻胚胎的患者中，冻融胚胎移植（Ｆｒｏｚｅｎ—　１．２新鲜取卵周期的控制性促排卵方案患者在进人ＩＶＦ／ＩＣ．　Ｔｈａｗｅｄ　Ｅｍｂｒｙｏ　Ｔｒａｎｓｆｅｒ，ＦＥＴ）是可供选择的临床策略，可避免再　ｓＩ治疗周期的前一次月经周期的黄体中期予ＧｎＲＨａ达菲林１．０　次取卵，减轻患者的身心压力和经济负担。然而迄今，冻胚移植　～１．８７５　ｍｇ进行降调节。月经来潮的第３—５天复诊，在达到降　的妊娠率仍较新鲜胚胎移植低…，为了ＦＥＴ进一步更好的临床　调节标准后开始使用促性腺激素（Ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ，Ｇｎ）行ＣＯＳ。根　运用，大量研究筛选出大量可能影响ＦＥＴ结局的相关因素，其中　据病人年龄、体重指数（Ｂｏｄｙ　Ｍａｓｓ　Ｉｎｄｅｘ，ＢＭＩ）、血清基础性激　关键因素包括胚胎质量和子宫内膜容受性　。　素水平、卵巢基础窦状卵泡数、既往取卵周期的卵巢反应性等决　本研究旨在通过提前解冻、观察卵裂球进一步卵裂情况，探　定Ｇｎ起始剂量，本研究中Ｇｎ启动剂量为１５０～３００　ＩＵ／ｄ。４天　讨冷冻胚胎复苏后进一步卵裂情况对ＦＥＴ妊娠结局的影响，期　后行超声监测卵泡发育情况、同时监测血清激素水平，据卵巢反　望为选择适宜ＦＥＴ的胚胎、提高ＦＥＴ周期临床妊娠率做参考。　应调整Ｇｎ剂量。　１对象与方法　当双侧卵巢内有１个及以上卵泡平均直径达１８　ｍｍ或３个　１．１研究对象以２０１０年５月～２０１１年１２月间新鲜移植周期　及以上卵泡平均直径达到１７　ｍｍ时，结合血清性激素水平，在当　未获继续妊娠、在２０１０年６月一２０１１年１２月期间在本中心进　晚２１时肌注ＨＣＧ（Ｃｈｏｒｉｏｎｉｅ　Ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｈｉｎ　ｆｏｒ　Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｌｉｖｚｏｎ　行的１９１个ＦＥＴ周期为研究对象。其中９７个自然周期，９５个激　Ｐｈａｒｍａ，Ｃｈｉｎａ）・６　０００～１０　０００　ＩＵ，于３６小时左右在超声引导下　素替代周期（Ｈｏｒｍｏｎｅ　Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ　Ｔｈｅｒａｐｙ，ＨＲＴ），９个促排卵　经阴道穿刺取卵手术。取卵后常规行体外受精及胚胎培养。　周期。纳入标准：①年龄≤４０岁；②子宫正常；③既往无子宫手　１．３冷冻及移植胚胎选择胚胎质量评分标准为：Ｉ级：卵裂　术史；④不超过３次ＩＶＦ／ＩＣＳＩ移植周期。排除标准：①年龄＞４０　球大小均匀，碎片０％～５％；ＩＩ级：卵裂球大小均匀或大致均　匀、碎片５％～１０％；Ⅲ级：卵裂球大小明显不均匀、碎片１５％～　５０％之间；ＩＶ级：卵裂球大小严重不均匀，碎片在５０％以上。　基金项目：广东省医学科研基金项目（编号：Ａ２０１１６４５）　优质胚胎标准：培养第３天观察，６～８个卵裂球胚胎，卵裂　龚绍琼：韶关市妇幼保健院广东韶关５１２０２６　球均匀或大致均匀，碎片≤１０％。若无优质胚胎，则选择可移　现代医院２０１２年７月第１２卷第７期专业技术篇Ｍｏｄｅｍ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　Ｊｕｌ　２０１２　Ｖｏｌ　１２　Ｎｏ　７　植／可冷冻胚胎进行移植（可移植／可冷冻胚胎：胚胎质量评分为　Ⅲ级的６～８细胞胚胎或Ⅱ级４细胞以上胚胎）。　冷冻胚胎选择：在受精后第３天选择２～３个新鲜优质胚胎　进行移植，剩余的Ｉ一Ⅱ级胚胎予以冷冻保存。　１．４胚胎解冻、培养及观察于移植前一天解冻，检查透明带　的完整性、卵浆的透亮程度，如有５０％以上卵裂球受损，则解冻　其他胚胎，培养过夜。移植日观察复苏后胚胎，如果＜５０％卵裂　球受损或至少有一个卵裂球发生进一步卵裂，可用于移植。记录　每个ＦＥＴ周期所移植胚胎中进一步卵裂个数最多者ｎ…，并据此　分为Ａ（ｎ　：０），Ｂ（ｎ　＝１），Ｃ（ｎ一＝２），Ｄ（ｎ一＝３）四组。　１．５　内膜及黄体准备　患者在新鲜移植周期未获妊娠或未继　续妊娠、及取消新鲜移植，待月经来潮第１～３　ｄ复诊，安排行　ＦＥＴ。　内膜准备方案：　既往月经规律、排卵正常、内膜生长良好的患者中采用自然　周期ＦＥＴ：月经第１Ｏ天起Ｂ超监测，主导卵泡平均直径１４　ｍｉｌｌ　时开始监测ＬＨ峰，出峰后７２～９６小时行ＦＥＴ。如主导卵泡发　育到１８　ｍｍ而未测出ＬＨ峰，肌注ＨＣＧ６　０００—１０　０００１Ｕ，９６小时　后行ＦＥＴ。　既往月经不规律、排卵障碍、内膜生长不良、卵泡黄素化未　破裂的患者采用激素替代周期准备内膜（Ｈｏｒｍｏｎｅ　Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ＨＲＴ）：月经第２天起予口服补佳乐，行阴道Ｂ超监　测，于子宫内膜厚度／＞８　ｍｍ时，肌注黄体酮４Ｏ～６０ｍｇ／ｄ，于肌注　黄体酮的第４～５天行ＦＥＴ。　１．６确定妊娠及随访移植后ｌ１～１４天行血清Ｂ—ＨＣＧ检　测，提示未妊娠即停黄体酮，若仍有冷冻胚胎，则待月经来潮后　安排再次行ＦＥＴ。若血清Ｂ—ＨＣＧ检测提示妊娠，则继续黄体　支持。移植后３０天超声检查见孕囊、胚芽或心管搏动者确定为　临床妊娠，继续黄体支持至妊娠１Ｏ周。　１．７统计学处理应用ＳＰＳＳ　１６．０统计软件对数据进行分析，　计量资料均值比较采用ｔ检验；计数资料及率的比较采用’Ｃ　检　验，Ｐ＜０．０５时认为该差异有统计学意义。　２结果　四组在平均年龄间差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。１９１例　ＦＥＴ周期共复苏胚胎４４８个。所有患者ＦＥＴ周期临床妊娠率为　３８．２％（７３／１９１）。各组临床妊娠率分别为：Ａ组２９．０％（９／３１），　Ｂ组３５．６％（２１／５８），Ｃ组４０．６％（２８／６９），Ｄ组４５．５％（１５／３３），　两两比较时差异有统计学意义（Ｐ＞０．０５）。见表１。　表１　复苏胚胎进一步卵裂球数与ＦＥＴ临床结局的关系　（％）　３讨论　３．１发育潜能是移植妊娠率的关键胚胎着床成功与否取决　于胚胎质量和胚胎与子宫内膜间相互适应　Ｊ，前者包括核型正　常与否，植入潜能和发育潜能等。在移植胚胎发育潜能的研究　中，学者们观察了移植人类早期卵裂胚胎对ＩＶＦ—ＥＴ新鲜周期　卵裂结局的影响，认为早期卵裂胚胎来自胞浆和核同步性较好　且均成熟的卵子，具有更好的代谢储备，因此移植早期卵裂胚胎　可以提高ＩＶＦ—ＥＴ的成功率，并随着移植早期卵裂胚胎数量的　增加，妊娠率、多胎妊娠率均有增高趋势　Ｊ。　３．２冻融胚胎复苏后卵裂球进一步卵裂情况是影响ＦＥＴ结局　的重要因素但是胚胎经过了冷冻和复苏后，卵裂球可能会部　分或全部裂解甚至凋亡，一方面卵裂球坏死直接减少了移植时　胚胎的细胞数目，另一方面坏死卵裂球释放的物质可能影响胚　胎的发育潜能，ＡＬＩＫＡＮＩ的研究中用显微操作损伤鼠胚中的部　分卵裂球后，胚胎可发育至囊胚阶段，但是囊胚孵出率大大降　低　…，而将坏死的卵裂球去除，可以提高冻融移植周期的Ｉ临床妊　娠率…　。　所以本研究认为在冻融周期中，不能硬搬新鲜周期的早期　卵裂评分系统，而是试图通过提前解冻来观察胚胎的进一步卵　裂情况来评价其发育潜能。我们在严格处理好胚胎与子宫内膜　相适应的前提下，通过提前解冻，观察胚胎进一步卵裂个数对妊　娠结局的影响。结果发现１９１例ＦＥＴ周期中，移植胚胎中卵裂　球没有进一步分裂的临床妊娠率为２９．０％（９／３１），至少分裂１　个（３５．６％，２１／５８），至少分裂２个（４０．６％，２８／６９），至少分裂３　个（４５．５％，１５／３３）间差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。表明提前　解冻观察复苏后胚胎进一步卵裂情况可为临床选择高质量胚胎　提供有价值参考。与之前几篇报道结论相同　。　３．３提前解冻观察复苏后胚胎继续生长与否对于评价胚胎种　植潜能的意义罗金”　等人通过回顾性分析６２３例ＦＥＴ周期的　资料，发现提前一天解冻和当天解冻的临床妊娠率差异无统计　学意义。由此可推定胚胎冻融后体外培养时间长短对妊娠结局　并无统计意义上的影响。　－　但另一方面冻融胚胎复苏后经培养通过观察是否继续发　育、卵裂，可了解其复苏后的发育潜能。陆湘　等发现即使在复　苏后部分卵裂球有破损，如果过夜培养后能表现继续生长、卵　裂，仍可获得较满意的种植率，提示部分破损的胚胎仍有较好的　种植潜能，ＶＡＮ　ＤＥＮ　ＥＬＳＴ　认为，复苏后卵裂球继续发育可能　对于着床时胚胎与子宫内膜的同步性更有利。此外，ＬＡ—　ＶＥＲＧＥⅢ　等对复苏后无生长的胚胎进行荧光原位杂交，发现这　类胚胎往往表现染色体异常，包括单倍体、三倍体、四倍体甚至　六倍体和嵌合体的发生，仅有２０％左右的胚胎表现为正常的二　倍体，因此提出建议不要移植这类复苏后无进一步生长的胚胎。　我们同时发现，随着胚胎复苏后卵裂球数目的进一步增加，　临床妊娠率似有逐渐升高的趋势（见图１）。但尚需进一步大样　本数据的支持和更详尽的统计学处理才能得出两者间是否存在　线性相关的结论。　图１　进一步增加卵裂球数与临床妊娠趋势分析　可见提前解冻胚胎、过夜培养，观察卵裂球继续生长情况有　助于评价胚胎种植潜能。　参考文献　［１］　ＥＤＧＡＲ　Ｄ　Ｈ，ＢＯＵＭＥ　Ｈ，ＪＥＲＩＣＨＯ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎ—　ｔａｌ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｏｆ　ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ　ｈｕｍａｎ　ｅｍｂｒｙｏｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌ　Ｅｎｄｏ—　ｃｆｉｎｏｌ，２０００，１６９（１／２）：６９—７２．　现代医院２０１２年７月第１２卷第７期专业技术篇Ｍｏｄｅｍ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　Ｊｕｌ　２０１２　Ｖｏｌ　１２　Ｎｏ　７　目标剂量美托洛尔缓释片治疗明显改善原发性高血压　伴心衰患者预后　张荣奎　彭晓玲林泽鹏　张志伟　ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　ＤＯＳＥ　ＯＦ　ＳＵＳＴＡ　ＪＮＥＤ　ＲＥＬＥＡＳＥ　ＴＡＢＬＥＴＳ　ＯＦ　ＭＥＴＯＰＲＯＬＯＬ　ｌＭＰＲＯＶＥＤ　ＰＲＯＧＮＯＳＩＳ　ＯＦ　ＨＹＰＥＲＴＥＮＳＩＶＥ　ＰＡＴＩＥＮＴＳ　ＷＩＴＨ　ＣＨＲＯＮｌＣ　ＨＥＡＲＴ　ＦＡＩＬＵＲＥ　ＺＨＡＮＧ　Ｒｏｎｇｋｕｉ，ＰＥＮＧ　Ｘｉａｏｌｉｎｇ，ＬＩＮ　Ｚｅｐｅｎｇ，ｅｔ　ａｌ　【摘要】　目的探讨目标剂量美托洛尔缓释片治疗原发性高血压伴心衰患者的疗效和血压、血管内　入选原发性高血压伴心衰患者１３３例，目　皮生长因子（ＶＥＧＦ）及高敏Ｃ一反应蛋白（ｈｓ－ＣＲＰ）的相关性。方法标剂量美托洛尔缓释片治疗１２个月．观察治疗前后一般临床资料、超声心动图、放射性核素和实验室检查结　果的变化。结果　目标剂量美托洛尔缓释片治疗１２个月后左室舒张末径及左室收缩末径显著减少；左室射　血分数（ＬＶＥＦ）、左室高峰充盈率（ＬＶＰＦＲ）及Ｎ末端Ｂ型利钠肽原（ＮＴ—ｐｒｏＢＮＰ）明显增加。目标剂量美托洛　尔缓释片治疗后患者收缩压、舒张压及脉压较治疗前显著降低，且血管内皮生长因子及高敏Ｃ一反应蛋白亦明　显降低。结论对原发性高血压伴心衰患者，目标剂量美托洛尔缓释片治疗可以显著改善心脏重构、心功能　和降低病死率。　【关键词】　心力衰竭，充血性高血压血管内皮生长因子ｃ－反应蛋白　美托洛尔缓释片　张荣奎彭晓玲林泽鹏　张志伟：深圳市孙逸仙心血管医院广东深圳５１８０２０　（接上页）　［２］　王　静，李豫峰，冻融胚胎移植结局的影响因素研究进展　［Ｊ］．中国优生与遗传杂志，２００９，１７（２）：６—８，１１０　［３］ＳＨＯＵＫＩＲ　Ｙ，ＣＡＭＰＡＮＡ　Ａ，ＦＡＲＬＥＹ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｅａｒｌｙ　ｃｌｅａｖａｇｅ　ｏｆ　ｉｎ—ｖｉｔｒｏ　ｆｅｒｔｉｌｉｚｅｄ　ｈｕｍａｎ　ｅｍｂｒｙｏｓ　ｔｏ　ｔｈｅ　２一ｃｅｌｌ　ｓｔａｇｅ：ａ　ｎｏｖｅｌ　［１０］ＡＬＩＫＡＮＩ　Ｍ，ＯＬＩＶＥＮＮＥＳ　Ｆ，ＣＯＨＥＮ　Ｊ．Ｍｉｃｒｏｓｕｒｇｉｅａｌ　ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐａｒｔｉｌｌａｙ　ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅ　ｍｏｕｓｅ　ｅｍｂｒｙｏｓ　ｐｒｏｍｏｔｅｓ　ｈａｔｃｈｉｎｇ　ａｎｄ　ｒｅ—　ｓｔｏｒｅｓｈｅｉｔｒｖｉｂｉａｌｉｔｙ［Ｊ］．ＨｕｍＲｅｐｒｏｄ，１９９３，８（１０）：１７２３—１７２８．　［１１］ＲＩＥＮＺＩ　Ｌ，ＵＢＡＬＤＩ　Ｆ，ＩＡＣＯＢＥＬＬＩ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ　ｐｏ—　ｔｅｎｔｉｌ　ｏｆａ　ｆｕｌｌｙ　ｉｎｔａｃｔ　ａｎｄ　ｐａｒｔｉｌｌａｙ　ｄａｍａｇｅｄ　ｃｒｙｏｐｍｓｅ￣ｅｄ　ｅｍｂｒｙｏｓ　ｆｔａｅｒｌａｓｅｒ—－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｒｅｍｏｖａｌ　ｏｆ　ｎｅｃｒｏｔｉｃ　ｂｌｓｔａｏｍｅ￣ｓ　ａｎｄ　ｐｏｓｔ——　ｉｎｄｉｃａｔｏｒ　ｏｆ　ｅｍｂｒｙｏ　ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｈｕｍ　Ｒｅｐｒｏｄ，１９９７，　１２（７）：１５３１—１５３６．　［４］　ＳＵＮＤＳＴＲＯＭ　Ｐ，ＳＡＬＤＥＥＮ　Ｐ．Ｅａｒｌｙ　ｅｍｂ￣ｏ　ｃｌｅａｖａｇｅ　ａｎｄ　ｄａｙ　２　ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｔｉｏｎ　ａｆｔｅｒ　ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍａｔｉｃ　ｓｐｅｒｍ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｐｍｄｉｃ－　ｔｉｎｇ　ｅｍｂｒｙｏ　ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　ｐｏｔｅｎｔｉｌ　ｉａｎ　ｓｉｎｇｌｅ　ｅｍｂｒｙｏ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｃｙｃｌｅｓ　ｔｈａｗ　ｃｕｈｕｒｅ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＦｅｒｔｉｌＳｔｅｒｉｌ，２００５，８４（４）：８８８—８９４．　［１２］ＶＡＮ　ＤＥＲ　Ｅ１．ＳＴ　Ｊ，ＶＡＮ　ＤＥＮ　ＡＢＢＥＥＬ　Ｅ，ＶＩＴＲＩＥＲ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．　Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｏｆ　ｅｒｙｏｐｍｓｅ￣ｅｄ　ｈｕｍａｎ　ｅｍｂｒｙｏｓ　ｗｉｔｈ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｃｌｅａｖａｇｅ　ａｆｔｅｒ　ｔｈａｗｉｎｇ　ｉｎｃｒｅａｓｅｓ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ　ａｎｄ　ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　［Ｊ］．Ｆｅｒｔｉｌ　Ｓｔｅｒｌｌ，２００８，８９（２）：４７５—４７７．　［５］ＳＡＬＵＭＥＴＳ　Ａ，ＨＹＤＩ￣Ｎ　Ｇｒａｎｓｋｏｇ　Ｃ，ＭＡＫＩＮＥＮ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｅａｒｌｙ　ｃｌｅａｖａｇｅ　ｐｒｅｄｉｃｔｓ　ｔｈｅ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｅｍｂｒｙｏｓ　ｉｎ　ｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｓｉｎｇｌｅ　［Ｊ］．Ｈｕｍ　Ｒｅｐｒｏｄ，１９９７，１２（７）：１５１３—２１．　［１３］ＧＵＥＲＩＦ　Ｆ，ＢＩＤＡＵＬＴ　Ｒ，ＣＡＤＯＲＥＴ　Ｖ，ｅｔ　ａ１．Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｎｉｇｄ—　ｉｎｇ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｅｓｔ　ｅｍｂｒｙｏｓ　ｆｏｒ　ｔｒｎｓｆａｅｒ　ａｆｔｅｒ　ｅｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ａｒｅ—　ｅｍｂｒｙｏ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ［Ｊ］．Ｈｕｍ　Ｒｅｐｒｏｄ，２００３，１８（４）：８２１　—８２５．　［６］ＩＳＩＫＬＡＲ　Ａ，ＭＥＲＣＡＮ　Ｒ，ＢＡＬＡＢＡＮ　Ｂ，ｅｔ　１．Ｅａｒｌａｙ　ｃｌｅａｖａｇｅ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｅｍｂｒｙｏｓ　ｔｏ　ｈｅ　ｔｔｗｏ—ｃｅｌｌ　ｓｔｇｅ．Ａ　ｓｉａｍｐｌｅ，ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｉｎｄｉｃａ—　ａｐｐｒａｉｓａ　ｌ［ｊ］．Ｈｕｍ　Ｒｅｐ　ｒｏｄ，２００２，１７（５）：１３２１—１３２６．　［１４］陆湘，李路，高晓红，等．卵裂球的完整性和生长与否对　冻融胚胎移植妊娠结局的影响［Ｊ］．生殖与避孕，２００７，２７　（８）：５１８—５２１．　ｔｏｒ　ｏｆ　ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｅｇｎａｎｃｙ　ｉｎ　ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ　ｓｐｅｒｍ　ｉｎｊｅｃ－　ｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｒｅｐｒｏｄ　Ｍｅｄ，２００２，４７（７）：５４０—５４４．　［７］　ＳＡＫＫＡＳ　Ｄ，ＳＨＯＵＫＩＲ　Ｙ，ＣＨＡＲＤＯＮＮＥＮＳ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｅａｒｌｙ　ｃｌｅａｖａｇｅ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｅｍｂｒｙｏｓ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｔｗｏ—－ｃｅｌｌ　ｓｔｇｅ　ａｆａｔｅｒ　ｉｎｔｒａｃｙｔｏ—・　［１５］ＪＯＳＨＩ　Ｂ　Ｖ，ＢＡＮＫＥＲ　Ｍ　Ｒ，ＰＡＴＥＬ　Ｐ　Ｍ，ｅｔ　１ａ．Ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｏｆ　ｈｕ—　ｍａｎ　ｆｏｚｅｎ—ｔｒｈａｗｅｄ　ｅｍｂ￣ｏｓ　ｗｉｔｈ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｃｌｅａｖａｇｅ　ｄｕｒｉｎｇ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅｓ　ｐｒｅｇｎａｎｃｙ　ｒａｔｅｓ．Ｈｕｍ　Ｒｅｐｒｏｄ　Ｓｃｉ，２０１０，３（２）：７６—　７９．　ｐｌａｓｍｉｃ　ｓｐｅｒｍ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ａｓ　ａｎ　ｉｎｄｉｃａｔｏｒ　ｏｆ　ｅｍｂｒｙｏ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．　Ｈｕｍ　Ｒｅｐｒｏｄ，１９９８，１３（１）：１８２—１８７．　［１６］罗金，杨菁，徐望明．胚胎冻融后体外培养时间对妊娠　［８］方—丛，庄广伦，钟依平，等．移植人类早期卵裂胚胎对ＩＶＦ　ＥＴ结局的影响［Ｊ］．中山大学学报：医学科学版，２００４，２５　结局的影响［Ｊ］．生殖与避孕，２０１１，３１（２）．　［１７］ＬＡＶＥＲＧＥ　Ｈ，ＶＡＮＤＥＲ　ＥＬＳＴ　Ｊ，ＤＥ　ＳＵＴＹＥＲ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｆｌｕｏｒｅｓ．　ｃｅｎｔ　ｉｎ—ｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｅｍｂｒｙｏｓ　ｓｈｏｗｉｎｇ　ｃｌｅａｖａｇｅ　（３）：９９—１００．　［９］　刁英，杨智敏，谭兵兵．观察早期卵裂和原核消失在体外　ａｒｒｅｓｔ　ａｆｔｅｒ　ｆｒｅｅｚｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｈａｗｉｎｇ［Ｊ］．Ｈｕｍ　Ｒｅｐｒｏｄ，１９９８，１３（２）：　４２５—４２９．　受精一胚胎移植周期中的应用价值［Ｊ］．