血清透明质酸在梗阻性黄疸肝损伤模型中的变化及其意义

山西医科大学学报（Ｊ　Ｓｈａｎｘｉ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ）２０１１年７月，４２（７　・５３５・　血清透明质酸在梗阻性黄疸肝损伤模型中的变化及其意义　梁斌ｈ，　任昌安　，　李文星　，　阎慧明　，　商中华　，　韩曙光　（ｔ中国人民解放军总医院肝胆外科医院，全　１００８５３；　山西医科大学第二临床医学院普通外科；　’通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｏｃｔｏｒｌｂ＠１６３．ｃｏｎ）　雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠６０只，随机分为胆　军肝胆外科研究所，北京摘要：　目的研究血清透明质酸的改变在梗阻性黄疸肝损伤中的变化及意义。　方法总管结扎组（ｎ＝３０）和假手术组（ｎ＝３０）。每组又根据术后不同时间点（１　ｄ、３　ｄ、７　ｄ、１４　ｄ、２１　ｄ）分为５个小组（６只／组），分　别采用放射免疫法、比色法、肝脏组织病理学检测等方法，观察各组动物体内血清透明质酸、肝功能、肝组织髓过氧化物酶、中　性粒细胞聚集情况以及肝脏组织病理学变化。　结果①胆总管结扎组各时间点所测得的血清透明质酸（ｓｅｒｕｍ　ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ，ＨＡ）、血清谷丙转氨酶（ｓｅｒｕｍ　ａｌａｎｉｎｅ　ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＡＬＴ）、血清总胆红素（ｔｏｔａｌ　ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ，ＴＢＩＬ）均较假手术组明显升高　（Ｐ＜０．０５）。②与假手术组相比，胆总管结扎组于术后３　ｄ肝脏组织内中性粒细胞浸润明显增多（Ｐ＜０．０５）。胆总管结扎组　内血清透明质酸的变化与肝脏组织内髓过氧化物酶（ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＭＰＯ）含量、中性粒细胞聚集程度呈正相关性（ｒＭＰ０＝　０．４６９，Ｐ＜０．０ｌ；ｒ十　№＝０．３９８，Ｐ＜０．０５）。　结论梗阻性黄疸过程中所出现的血清透明质酸增高与肝脏内所聚集的中性　粒细胞对肝窦内皮细胞的损伤有关。　关键词：梗阻性黄疸；肝窦内皮细胞；透明质酸；　中性粒细胞　中图分类号：ｔｌ５７５文献标志码：Ａ文章编号：　１００７—６６１１（２０１１）０７—０５３５—０４　ＤＯＩ：ｌ０．３９６９／Ｊ．ＩＳＳＮ．１００７—６６１１．２０１１．０７．００３　Ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｉｖｅｒ　ｉｎｊｕｒｙ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｊａｕｎｄｉｃｅ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ　ＬＩＡＮＧ　Ｂｉｎ　，ＲＥＮ　Ｃｈａｎｇ．ａｎ　，ＬＩ　Ｗｅｎ—ｘｉｎｇ　，ＹＡＮ　Ｈｕｉ－ｍｉｎｇ２，ＳＨＡＮＧ　Ｚｈｏｎｇ—ｈｕａ　，ＨＡＮ　Ｓｈｕ—ｇｕａｎｇ　（　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ａｎｄ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　ＰＬＡ　Ｇｅｅｎｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｈｉｅｎｓｅ尸　Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｈｏｏｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１００８５３，Ｃｈｉｎａ；　Ｄｅｐｔ　ｏｆＧｅｎｅｒａｌ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｓｈａｎｘｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｏｈｒ，Ｅ—ｍａｉｌ：ｄｏｃｔｏｒｌｂ＠１６３．ｃｏｍ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ　ｉｎｊｕｒｙ　ｒａｔｓ　ｏｆ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｊａｕｎｄｉｃｅ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｉｇｎｉｉｆ－　ｃａｎｅｅ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｓｉｘｔｙ　ｍａｌｅ　Ｗｉｓｔａｒ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｊａｕｎｄｉｃｅ　ｇｒｏｕｐ（ｎ＝３０）ａｎｄ　ｓｈａｍ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ（ｎ　＝３０）．Ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　５　ｓｕｂｇｒｏｕｐｓ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｄａｙｓ　ａｆｔｅｒ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ．Ｔｉｓｓｕｅｓ　ａｎｄ　ｂｌｏｏｄ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔ—　ｅｄ　ａｔ　ｄａｙｓ　１，３，７，１４，２１　ａｆｔｅｒ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｎ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｉｔｙ　ａｓｓａｙ．Ｔｈｅ　ｌｉｖｅｒ　ｆｕｎｅ—　ｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ　ｉｎ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｔｉｓｓｕｅ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ｃｏｌｏｒｍｅｔｒｉｅ　ａｓｓａｙ．Ｔｈｅ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｃｅｉｌｓ　ａｎｄ　ｐａｔｈｏ－　ｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｕｎｄｅｒ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ　ａｆｔｅｒ　ＨＥ　ｄｙｅ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ　①Ｓｅｒｕｍ　ａｌａｎｉｎｅ　ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＩＪＴ），ｔｏｔａｌ　ｂｉｌｉｕｒｂｉｎ　（ＴＢＩＬ），ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ（ＨＡ）ｌｅｖｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｌａｌ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｉｎ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｊａｕｎｄｉｃｅ　ｇｒｏｕｐ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｓｈａｍ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　ａｔ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔ（Ｐ＜０．０５）．（　Ｔｈｅ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｉｎ　ｏｂｓｔｕｒｃｔｉｖｅ　ｊａｕｎｄｉｃｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｓｈａｍ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　ａｔ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔ．Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＭＰＯ）ｉｎ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｔｉｓｓｕｅ　ａｎｄ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｄｅｇｒｅｅ　ｏｆ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｏｂｓｔｕｒｃｔｉｖｅ　ｊａｕｎｄｉｃｅ　ｇｒｏｕｐｓ　ａｆｔｅｒ　３　ｄａｙｓ　ｏｆ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ（ｒＭＰ０＝０．４６９，Ｐ＜０．０１；ｒｎｅｕＩｍ　ｉｌ　０．３９８，Ｐ＜０．０５，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｏｂｓｔｕｒｃｔｉｖｅ　ｊａｕｎｄｉｃｅ　ｍａｙ　ｂｅ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｉｎｊｕｒｙ　ｏｆ　ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｃａｕｓｅｄ　ｂｙ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｉｖｅｒ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｊａｕｎｄｉｃｅ；　ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ；ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ；　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　梗阻性黄疸是指由于肝外胆管梗阻所致的胆汁　１材料与方法　淤积性疾病，可导致严重的全身性的病理生理改　１．１实验分组及模型制作雄性健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠　变…。研究显示肝窦内皮细胞在肝脏微循环中具　６０只，体重２５０—３００　ｇ，由山西医科大学动物实验　有重要的调节作用　Ｊ，并具有吞噬清除、合成细胞　中心提供。动物随机分为：胆总管结扎组和假手术　外基质及脂质代谢等功能，在梗阻性黄疸肝脏损伤　组（只游离胆总管但不结扎组），每组各３０只。胆　中起到重要作用　’　，而有关梗阻性黄疸时肝窦内　总管结扎组根据术后不同的时间分为１　ｄ，３　ｄ，７　ｄ，　皮细胞的损伤报道较少。本文动态观察梗阻性黄　１４　ｄ，２１　ｄ共５个小组，分别记为ＯＪ１，ＯＪ３，ＯＪ７，　疸后血清透明质酸变化及其与中性粒细胞聚集之　ｏＪ１４，ｏｊ２１，每组６只。大鼠均常规喂养，术前１２　ｈ　间的关系，对肝窦内皮细胞的损伤及机制作深入　禁食，不禁水，采用３％戊巴比妥钠（５０　ｍｇ／ｋｇ）腹腔　探讨。　注射麻醉，备皮消毒后，取上腹正中纵切口，长约３　・５３６・　山西医科大学学报（Ｊ　Ｓｈａｎｘｉ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ）２０１１年７月，４２（７　ｃｍ，寻找胆总管并于近肝门处０　丝线行三重结扎，　在近端两处和远端一处间剪断。假手术组只游离胆　总管，不结扎离断胆总管，与胆总管结扎组类似，按　术后１　ｄ、３　ｄ、７　ｄ、１４　ｄ、２１　ｄ不同时间点分为５个小　在较高水平。胆总管结扎组血清谷丙转氨酶于术后　１　ｄ即明显增高（Ｐ＜０．０１），术后１４　ｄ血清谷丙转　氨酶有所下降，但仍明显高于假手术组（Ｐ＜０．０１），　见表１。　表１　Ｔａｂ　１　组，分别ＳＭ１、ＳＭ３、ＳＭ７、ＳＭ１４、ＳＭ２１。各组在相应　的时间点，经腹主动脉抽取血液，离心后将血清保存　血清总胆红素和谷丙转氨酶的变化　（ｉ±ｓ）　Ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ｔｏｔａｌ　ｂｉＨｒｕｂｉｎ　ａｎｄ　ｓｅｒｕｍ　ａｌａ－　于一２０℃冰箱待测；取血后，切取不同部位肝脏组　织３块，分别用于髓过氧化物酶测定、组织病理学检　ｎｉｎｅ　ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ　ｉｎ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｊａｕｎｄｉｃｅ　测以及湿干比重测定。　１．２仪器与试剂分析天平、Ｏｌｙｍｐｕｓ光学显微　镜、７２２分光光度仪、ＮＳ－６４８型放射免疫＾ｙ计数器。　透明质酸放射免疫测定盒（上海海研医学生物技术　中心）、肝脏组织髓过氧化物酶（ＭＰＯ）、谷丙转氨　酶、血清总胆红素、血清肌酐检测试剂盒（南京建成　生物工程研究所）。　１．３血清透明质酸及其他血清学指标测定血清　透明质酸测定采用放射免疫法；血清谷丙转氨酶：赖　氏法；血清总胆红素：固兰Ｂ法；血清肌酐：苦味酸　不除蛋白法。ＭＰＯ测定：取冰冻新鲜肝脏组织样　本，制备成浓度为５％的组织匀浆，然后加人Ｈ　０　显色剂，水浴后立即在４６０　ｎｍ处测定ＯＤ值。具体　方法参照ＭＰＯ测试盒说明。ＭＰＯ活力以３７℃反　应体系中Ｈ：０：被分解１　ｐ，ｍｏｌ为１个活力单位。　ＭＰＯ活性（Ｕ／ｇ）＝（测定管ＯＤ值一对照管ＯＤ　值）／１１．３×取样量。以上各指标的检测均严格按　照说明书进行操作。　１．４组织病理学检查　切取大鼠部分肝脏，经　１０％的中性甲醛固定２４　ｈ，常规石蜡包埋、切片、ＨＥ　染色。在高倍镜下（ＨＰＦ×１　０００）随机取５０个视野　行双盲法中性粒细胞计数，以评价其聚集程度。　１．５肝脏组织湿干比切取部分肝脏标本，置于　５５　ｏＩ＝的烘箱内烘烤至少７２　ｈ或者至取得一恒定数　值为止。肝脏组织湿干比：肝脏湿重／干燥后重量。　１．６统计学分析所有数据均用　±ｓ表示，采用　ＳＰＳＳＩＯ．０软件分析，采用Ｏｎｅ—ｗａｙ　ＡＮＯＶＡ进行方　差齐性检验，组间比较采用ＳＮＫ．ｑ检验。　２结果　２．１血清总胆红素和谷丙转氨酶假手术组各时　间点血清总胆红素及血清谷丙转氨酶之间没有明显　变化（Ｐ＞０．０５），故未将ＳＭ各组数据列出，而将其　作为一整体与ＯＪ各组进行比较。与假手术组相比，　胆总管结扎组血清总胆红素于胆总管结扎后１　ｄ即　明显增高（Ｐ＜０．０１），术后３　ｄ达到高峰，其后保持　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｓｈａｍ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔｓ　ａｆｔｅｒ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ（　±ｓ）　与假手术（ＳＭ）组相比，　Ｐ＜０．０５，一Ｐ＜０．Ｏ１　２．２血清透明质酸和肌酐①假手术组血清透明　质酸于术后１　ｄ均明显高于该组术后其他时间（Ｐ＜　０．Ｏ１），与胆总管结扎组相比较仍明显减少（Ｐ＜　０．０５），见表２。胆总管结扎组血清透明质酸在术后　３　ｄ及其后的时间均明显高于相应的假手术组（Ｐ＜　０．０１），术后２１　ｄ达到高峰（Ｐ＜０．Ｏ１），见表２。　②胆总管结扎组血清肌酐较假手术组增高明显（Ｐ　＜０．０５），其高峰出现在手术后第３天。胆总管结　扎组和假手术组组内血清肌酐未见明显变化（Ｐ＞　０．０５），见表２。③胆总管结扎组血清透明质酸的　增高早于血清肌酐的增高，且并未随其发生相应　变化。　经相关分析显示胆总管结扎组血清透明质酸与　血清肌酐变化之间无明显相关性（Ｐｅａｒｓｏｎ相关系数　ｒ双侧＝一０．０３６，Ｐ＝０．８４９）。　２．３肝脏组织髓过氧化物酶含量及湿干比①肝　脏组织中髓过氧化物酶反映中性粒细胞在肝脏内的　聚集程度。随着手术时间延长，肝脏内中性粒细胞　的聚集程度明显增加，见表３。②肝脏湿干比的变　化显示胆总管结扎组较假手术组术后不同时间均有　统计学差异，肝脏组织的水肿于２１　ｄ时达高峰，见　表３　山西医科大学学报（Ｊ　Ｓｈａｎｘｉ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ）２０１１年７月，４２（７　表２　Ｔａｂ　２　血清透明质酸和肌酐的变化（　±ｓ，ｎ＝６）　・５３７・　Ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｓｅｒｕｍ　ｃｒｅａｆｉｎｉｎｅ　ｉｎ　ｏｂｓｔｕｃｔｒｉｖｅ　ｊａｕｎｄｉｃｅ　ｇｒｏｕｐ　ｎｄ　ａｓｈａｍ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　ａｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔｓ　ａｆｔｅｒ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ（孑±ｓ，　＝６）　同时间点与假手术组相比，　Ｐ＜０．０５，一Ｐ＜０．０１；同组与术后１　ｄ比较，　Ｐ＜０．０１　表３　肝脏组织髓过氧化物酶和湿干比的变化（　±ｓ，ｎ＝６）　Ｔａｂ　３　Ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ａｎｄ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｗｅｔ　ａｎｄ　ｄｒｙ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｌｉｖｅｒ　ｉｎ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｊａｕｎｄｉｃｅ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｓｈａｍ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔｓ　ａｆｔｅｒ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ（哥±ｓ，ｎ＝６）　ｌ司时Ｉ司点与假手术组相比，　Ｐ＜０．０５，～Ｐ＜０．０１　２．４光镜观察①ＨＥ染色：胆管梗阻急性期（术　表４　肝组织内中性粒细胞聚集程度（元±ｓ）　后ｌ　ｄ）可见肝脏充血水肿明显；其后早期肝细胞浊　Ｔａｂ　４　Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒ　ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ　肿，水样变性或脂肪变性，肝细胞内少见胆色素颗　（ＰＭＮ）ｉｎ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｔｉｓｓｕｅ　ｉｎ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｊａｕｎｄｉｃｅ　粒，小胆管内不见胆栓形成，汇管区无明显改变。随　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｓｈａｍ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　梗阻时间延长，肝细胞变性较前为重，部分肝细胞坏　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔｓ　ａｆｔｅｒ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ（　±ｓ）　死，肝细胞内可见胆色素沉着、枯否细胞增生、汇管　区水肿、小胆管增生明显，管腔内可见胆栓形成，汇　管区可见明显炎症细胞浸润及纤维组织增生。肝脏　纤维化程度于术后２１　ｄ时肝脏纤维化最重。②假　手术组各时间点肝组织内中性粒细胞聚集程度的差　异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），故未将ＳＭ各组数据　与假手术组相比，一Ｐ＜０．０１　列出，而将其作为一整体与０Ｊ各组进行比较（见表　４）。数据显示胆总管结扎组术后１　ｄ中性粒细胞数　质酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ，ＨＡ）是一种没有支链结构的　即有增高，随着时间的延长胆总管结扎组中性粒细　高分子量黏多糖，由间质细胞合成，广泛存在于全身　胞较假手术组明显增高。　结缔组织中，代谢产生的ＨＡ可经淋巴系统进入血　２．５相关分析胆总管结扎组血清透明质酸的变　液循环。肝窦内皮细胞表面有ＨＡ受体，是清除血　化分别与肝脏组织内髓过氧化物酶含量、中性粒细　液中ＨＡ的主要部位，血清中的ＨＡ可特异性地被　胞聚集程度呈正相关性（分别相关系数ｒ＝０．４６９，尸　肝窦内皮细胞摄取和降解¨　，少量小分子由肾小球　＝０．００９，双侧；ｒ＝０．３９８，Ｐ＝０．０３，双侧）。　滤过。因此，ＨＡ的改变可用以反映肝窦内皮细胞　３讨论　的功能，显示肝脏微循环损伤状况…　。　梗阻性黄疸后肝脏微循环障碍涉及对肝窦内皮　胆总管结扎组术后１　ｄ血清ＨＡ及转氨酶增高　细胞功能的评价，近年的研究显示通过血清透明质　迅速，肝脏出现充血，水肿，有片状坏死等急性改变；　酸的变化可反映该细胞的功能改变　。血清透明　而假手术组早期血清ＨＡ明显升高（１　ｄ），其后快速　・５３８・　山西医科大学学报（Ｊ　Ｓｈａｎｘｉ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ）２０１１年７月，４２（７　［２］Ｏｈｔｓｕｋａ　Ｍ，Ｍｉｙａｚａｋｉ　Ｍ，Ｋｕｂｏｓａｗａ　Ｈ，ｌｅ　ａ１．Ｒｏｌｅ　ｏｆｎｅｕｔｍｐｈｉｌｓ　ｉｎ　ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　ｉｎｊｕｒｙ　ａｆｔｅｒ　ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ　ｈｅｐａｔｃｔｅｏｍｙ　ｉｎ　下降并稳定在较低水平。可见，ＨＡ早期快速升高　一次性胆管完全梗阻所造成的急性肝脏损伤以及手　术创伤有关。胆总管完全结扎后３　ｄ开始，血清透　明质酸逐步增高，反映胆道完全梗阻后早期即可影　响肝窦内皮细胞功能变化¨　。长时间的胆道梗阻　（２１　ｄ），大鼠血清透明质酸明显增高，并与梗阻性黄　ｃｈｏｌｅｓｔａｔｉｃ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｍｌ　Ｈｅｐａｔｏｌ，２０００，１５（８）：８８０—　８８６．　［３］ＴａｕＰｅ　Ｄ，Ｋａｍｉｍｏｔｏ　Ｙ，Ｋａｉ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆｂｉｌｉａｒｙ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｎｄｏｃｙｔｉｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ　ａｎｄ　ｌｉｖｅｒ　ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ　ｅｎｄｏ－　ｔｈｅｌｉｌａ　ｃｅｉｌｓ　ｉｎ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ　ｓｕｒｇ　Ｒｅｓ，１９９６，２８（３）：２０１—２１１．　疸后肝脏纤维化程度相紊合。研究表明肝窦内皮细　胞在肝脏纤维化过程中亦起一定的作用，表现为肝　窦内皮细胞毛细血管化，并大量合成ＨＡ，因此ｌ临床　中可检测血清ＨＡ，用于肝纤维化的早期诊断¨引。　本研究显示梗阻性黄疸发生过程中，ＨＡ的变化趋　势与Ｃｒ的变化之间不具有相关性，其变化主要反映　肝脏窦内皮细胞损伤的状况。　髓过氧化物酶（ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＭＰＯ）存在于　中性粒细胞的嗜天青颗粒中，约占细胞干重的５％，　通过测定组织内ＭＰＯ含量可用于推断组织中中性　粒细胞的聚集程度。本实验通过测定肝脏组织中髓　过氧化物酶的含量，以及结合形态学上观察肝脏组　织中中性粒细胞的聚集程度，显示胆总管结扎组血　清透明质酸的变化分别与肝脏组织内髓过氧化物酶　含量、中性粒细胞聚集程度呈正相关性，表现为随着　梗阻时间的延长，肝脏组织内中性粒细胞聚集程度　增加，表明肝窦内皮细胞的损伤与胆道梗阻导致的　活化的中性粒细胞聚集有关。　梗阻性黄疸过程中因内毒素血症的出现¨　，会　使枯否细胞激活并产生一些前炎症因子，如ＴＮＦ－ｏ／、　ＩＬ＿ｌ５等，这些前炎症因子将刺激中性粒细胞趋化因　子和激活调节因子（ＩＬ－８、及细胞因子诱导的中性粒　细胞趋化因子（ｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｃｈｅｍｏａｔ—　ｔｒａｃｔａｎｔ，ＣＩＮＣ）的释放¨　。加之，肝内胆管扩张，窦　壁细胞肿胀，血管收缩和舒张物质失平衡以及ＰＭＮ　变形能力低下等原因均有利于中性粒细胞在肝脏中　聚集，该细胞在细胞因子、黏附分子等调控下，细胞　在肝窦内滚动、黏附、渗出，并释放炎症因子、水解蛋　白以及氧自由基等物质，导致肝窦内皮细胞损伤，进　而加重肝脏损伤程度¨　。　综上，本研究认为梗阻性黄疸后血清ＨＡ的早　期明显增高，可反映了肝脏内皮细胞功能的早期改　变，而中性粒细胞在肝脏内大量聚集是导致梗阻性黄　疸肝窦内皮细胞损伤，并致微循环障碍的主要原因。　参考文献：　［１］黄志强．梗阻性黄疸的病理生理［Ｍ］／／黄志强．胆道外科学．　山东：山东科技出版社．１９９９：１６８—１８Ｉ．　ｆ４ｊ　Ｏｋａｙａ　Ｔ，Ｎａｋａｇａｗａ　Ｋ，Ｋｉｍｕｒａ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｊａｕｎｄｉｅｅ　ｉｍ－　ｐｅｄｅｓ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｍｉｅｒｏｅｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏ］ｏ—　ｇＹ，２００８，５５（８８）：２１４６—２１５０．　［５］Ｌａｓｃｈｋｅ　ＭＷ，Ｄｏｌｄ　ｓ，Ｍａｎｇｅｒ　ＭＤ，ｅｔ　ａ１．Ｐｌａｔｅｌｅｔ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ａｃｃｕ－　ｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｓｉｎｕｓｏｉｄｓ　ｍｅｄｉａｔｅｓ　ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　ｄａｍ－　ａｇｅ　ｉｎ　ｂｉｌｅ　ｄｕｃｔ　ｌｉｇａｔｉｏｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｈｏｌｅｓｔａｓｉｓ［Ｊ］．Ｂｒ　Ｊ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，　２００８，１５３（１）：１４８—１５６．　［６］　ＭｃＫｅｏｗｎ　ＣＭ，Ｅｄｗａｒｄｓ　Ｖ，Ｐｈｉｌｉｐｓ　ＭＪ，ｅｌ　ａ１．Ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ　ｌｉｎｉｎｇ　ｃｅｌｌ　ｄａｍａｇｅ：ｔｈｅ　ｃｒｉｔｉｃａｌ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎ　ｃｏｌｄ　ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｖｅｒ　ａｌ—　ｌｏｇｒａｆｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ［Ｊ］．Ｔｒｎａｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，１９８８，４６（２）：１７８—１９１．　［７］Ａｒａｉ　Ｍ，Ｍｏｃｈｉｄａ　Ｓ，Ｏｈｎｏ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　ｄａｍａｇｅ　ｂｙ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｍａｃｍｐｈａｇｅｓ　ｉｎ　ｒａｔ　ｌｉｖｅｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｇａｓｔｅｒ—　ｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１９９３，１０４（５）：１４６６—１４７１．　［８］Ｙｏｓｈｉｄｏｍｅ　Ｈ，Ｍｉｙａｚａｋｉ　Ｍ，Ｓｈｉｍｉｚｕ　Ｈ，ｅｌ　ａ１．Ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｊａｕｎｄｉｃｅ　ｉｍｐａｉｒｓ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌａ　ｃｅｌｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｎｄｅｒｓ　ｌｉｖｅｒ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ　ｔｏ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｉｓｅｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｈｅｐａｔｏｌ，　２０００，３３（１）：５９—６７．　［９］　Ｏｈｔｓｕｋａ　Ｍ，Ｍｉｙａｚａｋｉ　Ｍ，Ｋｏｎｄｏ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ—ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｓｉ—　ｎｕｓｏｉｄａｌ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　ｉｎｊｕｒｙ　ａｆｔｅｒ　ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ　ｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙ　ｉｎ　ｃｈｏｌｅｓｔａｔｉｃ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９７，２５（３）：６３６—６４１．　［１０］　Ｗｅｓｔｅｒｂｅｒｇ　Ｇ，Ｂｅｒｇｓｔｒｏｍ　Ｍ，Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ　ｓ，ｅｌ　ａ１．Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ　ｏｆ　ｐｏｌｙ－　ｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｕｓｉｎｇ［１　１　Ｃ］ｃｙａｎｏｇｅｎ　ｂｒｏｍｉｄｅ．Ｉｎ　ｖｉｖｏ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｅ—　ｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　１１Ｃ．ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ　ｕｐｔａｋｅ　ｋｉｎｅｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｎｕｃｌ　Ｍｅｄ　Ｂｉｄ，　１９９５，２２（２）：２５１—２５６．　［１１］ＤｅａｃｉｕｃＩＶ，Ｂ￣ｇｂｙＧＪ，ＬｕｎｇＣＨ，　ａＬＨｙａ／ｔｆｏｕｉｃ　ａｃｉｄ　ｕｐｔａｋｅ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ，ｐｅｒｆｕｓｅｄ　ｒａｔ　ｌｉｖｅｒ：ａｌｌ　ｉｎｄｅｘ　ｏｆ　ｈｅｐ￣ｃ　ｓｉｎｕｓｅｉｄａｌ　ｅｌｌ－　ｄｏｔｈｅｌｉｌａ　ｃｅｌｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９３，１７（２）：２６６—２７２．　［１２］Ｓｈｉｍｉｚｕ　Ｈ，Ｈｅ　Ｗ，Ｇｕｏ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｓｅｒｕｍ　ｈｙａｌｕｍｎａｔｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｓｓｅ￣一　ｍｅｎｔ　ｏｆ　ｌｉｖｅｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｆｔｅｒ　ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ　ｌｉｖｅｒ　ｔｒａｉｌｓ－　ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９４，２０（５）：１３２３—１３２９．　［１３］Ｘｕ　Ｂ，Ｂｒｏｏｍｅ　Ｕ，Ｕｚｕｎｅｌ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｃａｐｉｎａｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｓｉｎｕ・　ｓｏｉｄ　ｂｙ　ｌｉｖｅｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ－ｒｅａｃｔｉｖｅ　ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｐａｔｈｏｌ，２００３，１６３　（４）：１２７５—１２８９．　［１４］Ｐａｐａｋｏｓｔａｓ　Ｃ，Ｂｅｚｉｒｔｚｏｇｌｏｕ　Ｅ，Ｐｉｔｉａｋｏｕｄｉｓ　Ｍ，ｌｅ　ａ１．Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎｅｍｉａ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｏｒｔａｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｙｓｔｅｍｉｃ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｊａｕｎｄｉｃｅ　［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｅｘｐ　Ｍｅｄ，２００３，３（２）：１２４—１２８．　［１５］Ｄａｗｉｓｋｉｂａ　Ｊ，Ｋｏｍａｆｅｌ　Ｐ，Ｋｗｉａｔｋｏｗｓｋａ　Ｄ，　ａ１．Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ－ａ］｝ｐｈａ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｄｅｕｋｉｎ　６　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｕｃ－　ｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌａ　ｓｙｓｔｅｍ　ｉｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｊａｕｎｄｉｃｅ　ｉｎ　ｒａｔｓ［Ｊ］．ＨＰＢ（ＯｄｏＭ），２００２，４（１）：１１—１９．　［１６］　韩喜春，金山，韩宁．肝缺血再灌注损伤中乌司他丁对核因　子一ＫＢ活化的影响及对损伤的保护作用［Ｊ］．中华实验外科　杂志，２００６，２３（１）：６０—６２．　作者简介：　梁斌，男，１９７６—０３生，博士，主治医师．　［收稿１３期：２０１１—０４—１２］