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龙眼核提取物的抑菌活性研究

2021-04-03 来源:榕意旅游网
2011年第4期 (总第74期) 漳州师范学院学报(自然科学版) Journal of Zhangzhou Normal University(Nat.Sci.) No.4.2011年 General NO.74 文章编号:1008-7826(2011)04-0087-06 龙眼核提取物的抑菌活性研究 邹金美 ,黄冰晴 ,韦丽香’,王栩 ,张国广 (1.漳州师范学院生物科学与技术系,福建漳州363000;2.朝阳师范专科学校生化工程系,辽宁朝阳122000) 摘要:本研究检测了龙眼核95%乙醇提取物对8种病原茵和四种丝状真菌的抑制活性.结果表明龙眼核酒 精提取物能有效抑制除大肠杆菌ATCC35218外7种供试病原茵生长,包括真菌白色念珠茵;对四种丝状真菌中 的秀珍菇和杏鲍菇的抑制活性要强于两种药用菌灵芝和北虫草;对7种病原菌的最小抑茵浓度均不高于100 mg/mL,抑茵活性随pH升高有下降趋势,抑茵活性物质有较强的热稳定性. 关键词:龙眼核;提取物;抑茵治陛 中图分类号:¥667.2 文献标识码: A Study on Antimicrobial Activities of the Extracts from Longan Seed ZOU Jin-mei ,HUANG Bing-qing ,WEI Li.xiang。Xu ,ZHANG Guo.guang ,WANG (1.Department of Biological Science and Technology,Zhangzhou Normal University,Zhangzhou,Fujian 363000。China;2. Department of Biochemical Engineering,Chaoyang Normal College,Chaoyang,Liaoning 1 22000,China) Abstract:The antimicrobial activities were investigated that 95%ethanoI extracts of the Iongan seed inhibited eight kinds pathogenic microorganism and four kinds of filamentous fungi.The results showed that extract of Iongan seed can effectively restrain the growth of seven kinds among tested microorganism,including fungi candida albicans,except E coil ATCC35218,and inhibitory activity of Iongan seed extract against two edible fungi such as Pleurotus geesteranus and eryngiiwas stronger than two medicinal fungi such as Ganoderma lucidum and Cordyceps militaris.The minimum inhibitory concentration were not higher than 1 00 mg/mL to the seven kinds of pathogenic microorganisms.Antimicrobial activity went down with pH increased trend,and was strong stable under high temperature. Key words:Dimocarpus Longana Lour;ethanol extracts;antimicrobial activity 1 引言 龙眼(DimocarpusLongana Lour.)是无患子科龙眼属植物,在我国, 东、广西、福建和台湾等省份均 广泛栽培.目前龙眼加工基本以制成龙眼干、龙眼果肉罐头为主,龙眼核是加工过程中产生的主要废弃物, 每年全世界的废弃量高达几十万吨¨ .龙眼核含有丰富的营养物质,如高达60.9%的淀粉、14-3%还原糖、 蛋白质和脂类等L2J,还有较高含量的黄酮 一 和多酚类[I,5-8]物质.龙眼核的药理研究发现其提取物具有很好 的降血糖作用 ’ⅢJ、抗氧化作用和酪氨酸酶抑制活性 , J,对龙眼核抑菌活性的研究[121尚少见报道.本研究 用8种病原菌和4种食药用丝状真菌为测试菌株检测了龙眼核乙醇提取物的抑菌活性,为进一步从龙眼核 中分离、发现新的抑菌活性物质或开发为食品防腐剂提供实验依据. 2材料与方法 收稿日期:2011-10—23 基金项目:福建省自然科学基金项目(2010J0124O);2011年福建省大学生科研创新项目 作者简介:邹金美(1973-),女,福建省浦城县人,讲师. 漳州师范学院学报(自然科学版) 2.1实验材料及菌种 市场上购得的新鲜龙眼去壳和肉后得到龙眼核,龙眼产地福建和海南等地,龙眼核50 ̄C烘干至恒重备 用.牛津杯购自北京先驱威锋技术开发公司(杯内径6 mlTl,外径8 mm);氨苄西林和头孢唑林药敏滤纸片 购自杭州天和微生物试剂有限公司;8种病原菌为革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC25922和 ATCC35218、普通变形杆菌(Proteas vulgaris)CMCC49027、沙门氏菌(Salmonella)CMCC50094、铜绿假单 胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC27853和革兰氏阳性菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CMCC6350 1、金 黄色葡萄球菌(Staphylococous aureus)ATCC25923;真菌:白色念珠菌(Candida albicans)ATCC10231;4种 食药用丝状真菌是秀珍菇(Pleurotus geesteranus),杏鲍菇(Pleurotus eryngii),灵芝(Ganoderma lucidum), 北虫草(Cordyeeps militaris),上述菌种均保存于漳州师范学院生物系微生物教研室. 2.2实验方法 2.2.1龙眼核提取物的制备 将烘干至恒重的龙眼核在粉碎机中粉碎成粉末状,取粉末1 00 g,加入500 mL的95%乙醇,置于50 ̄C 恒温磁力搅拌器中搅拌浸提4 h,离心得到上清,连续浸提两次,合并上清液,55 ̄C减压浓缩后定容至终 浓度为l g/“1L的原液备用. 2.2.2供试病原菌悬液的制备 培养细菌的牛肉膏蛋白胨培养基及真菌培养的PDA培养基的制备参照文献[131.供试细菌和真菌分别 用相应的培养基进行菌种斜面活化,然后每种菌种分别挑取菌苔,用液体培养基配制成菌液浓度为l0。一l0 CFU/mL的菌悬液. 2.2.3龙眼核提取液对8种病原菌的抑菌圈直径测定 牛津杯法测定[141;取菌悬液150 在制备好的固体平皿上涂布均匀,制成含菌平板.将灭菌后的牛津 杯用镊子轻轻放置在含菌平板上,然后向牛津杯中加入龙眼核提取物100 ;同时设置无菌水作为空白对 照,氨苄西林和头孢唑林滤纸片作为阳性对照,提取物及对照均设3个重复.将各培养皿置于恒温培养箱 中培养(细菌37 0C,12~l6 h;真菌28 ̄C,48 h),分别观察结果,用十字交叉法测定抑菌圈直径的大小, 记录的抑菌圈直径以均值表示并进行方差分析,组间用LSD法比较差异显著性,p<0.05视为差异显著. 2.2.4龙眼核提取物对4种丝状真菌的抑制效果测定 从保存的丝状真菌试管斜面上挑取菌丝接种在PDA平板的中央,置于28 ̄C培养箱中培养,待菌丝将要 长满平板时使用,接种时用打孑L器(6 mlT1)在平板相同直径的圆圈上打菌丝圆片,然后接种在制备好的含 不同浓度龙眼核提取物(0 g/L、40 g/L、80 g/L三个梯度)的PDA平板中央.至其中一种处理菌丝长满培养 皿后测量所有处理的菌丝生长长度.计算菌丝生长率和龙眼核处理组对菌丝生长抑制率,菌丝生长率 (mm/d)=(菌丝生长长度一接种的菌片半径)/培养天数,抑制率(%)=[(对照菌丝生长率 生素处理 菌丝生长率)/对照菌丝生长率]×100%,菌丝生长率以均值表示并进行方差分析,组问用LsD法比较差异 显著性,p<0.05视为差异显著. 2.2.5最小抑菌浓度(MIC)测定 以7种病原微生物为试验材料,采用二倍稀释法¨ ,将龙眼核的乙醇提取物原液分别进行倍比稀释, 制成终浓度为100 mg/mL、50 mg/mL、25 mg/mL、12.5 mg/mL和6.25 mg/mL的含药平板,加入0.1 mL 每种菌悬液,用无菌棉涂布均匀.相同的药物稀释系列,涂布灭菌水作为对照.置于适宜温度下培养一定 时间后观察结果,培养基中无菌生长的最低浓度即为该提取物的最小抑菌浓度.各浓度及对照均设3个重 第4期 邹金美,黄冰晴,韦丽香,王栩,张国广:龙眼核提取物的抑菌活性研究 89 复. 2.2.6 pH和高温对抑菌活性的影响 用柠檬酸和NaOH分别调节固体培养基的pH为4.5、5.5、6.5、7.5四个梯度,对不同细菌用比其MIC 高一个梯度的药液浓度进行测定(方法同MIC测定),同时设置无菌水作对照.将龙眼核酒精提取液的原液 取出一部分置于高压灭菌锅中于121℃处理20 min,牛津杯放置于涂布有不同菌液的平板上后,分别加入 提取液原液和高温处理的提取液100 gL,培养一定时间后测定抑菌圈大小,抑菌圈直径以均值表示并进行 方差分析和多重比较. 3结果与分析 3.1龙眼核提取物对8种病原菌的抑制效果 龙眼核的乙醇提取物对6种细菌和白色念珠菌具有不同程度的抑制作用(表1、图1),对大肠杆菌 ATCC35218的生长没有观察到明显的抑制现象,95%乙醇对所有菌株未表现抑制活性.提取物对金黄色葡 萄球菌ATCC25923的抑制作用最强,抑菌圈直径达27.95 nZITI. 表1龙眼核提取物对8种病原菌的抑菌圈直径(mm) 注:同行中抑菌圈直径后不同字母表示差异显著(p<0.05),相同字母表示差异未达到显著水平(p>0.05) ’ 图1龙眼核对8种病原菌的抑菌效果 l、大肠杆菌ATCC25922,2、大肠杆菌ATCC35218,3、沙门氏菌CMCC50094,4、铜绿假单胞菌ATCC27853,5、普通 变形杆菌CMCC49027,6、枯草芽孢杆菌CMCC63501,7、金黄色葡萄球菌ATCC25923,8、白色念珠菌ATCC1023l 漳州师范学院学报(自然科学版) 2011年 3.2龙眼核提取物对4种食药用丝状真菌的抑制效果 4种丝状真菌在PDA附加不同浓度的龙眼核提取物中,生长速度受到不同程度的抑制 (表2、图2),且随着浓度的增大抑制作用增强,尤其是对食用菌秀珍菇和杏鲍菇,而药用菌灵芝和北虫 草受到的抑制作用较小.在添加龙眼核的培养基上,灵芝和秀珍菇菌丝呈现绒毛状生长,灵芝平板不易形 成菌皮,北虫草和杏鲍菇的菌丝色泽更加洁白,但北虫革受到光照诱导后不易转色 表2龙眼核提取物对4种丝状真菌菌丝生长的影响 注:同行中菌丝生长率后不同字母表示差异显著(p<0.05),相同字母表示差异未达到显著水平(p>0.05) 1 2 3 1 2 3 图2龙眼核提取物对4种食用菌抑制效果 I、2、3所对应的一列培养基分别为PDA、PDA附加40 L和PDA附加80 L龙眼核提取物,a、b、C、d分别接种的四 种真菌为秀珍菇、杏鲍菇、灵芝和北虫草. 3.3龙眼核提取物的最小抑菌浓度(MIC) 龙眼核乙醇提取物对大肠杆菌ATCC25922、普通变形杆菌CMCC49027、沙门氏菌CMCC50094、铜 绿假单胞菌ATCC27853、枯草芽孢杆菌CMCC63501、金黄色葡萄球菌ATCC25923和白色念珠菌 ATCC10231的最小抑菌浓度分别为50 mg/mL、100 mg/mL、100 mg/mL、50 mg/mL、50 mg/mL、50 mg/mL 和100mg/mL. 3.4 pH对龙眼核提取物抑菌活性的影响 pH对龙眼核乙醇提取物的抑菌活性有一定的影响,在pH上升到7.5时对大肠杆菌、普通变形杆菌、 枯草芽孢杆菌和白色念珠菌的抑菌活性降低.如果作为食品保鲜剂龙眼核提取物可以用于中性和酸性食品 的保鲜. 3.5高温对龙眼核抑菌活性的影响 龙眼核提取物经121℃高温处理20 min后,对多数测试菌所产生的抑菌圈大小与未经热处理的对照无 显著性差异,只有在对普通变形杆菌和白色念珠菌的抑菌测试中有显著差异性,基本表明乙醇提取的龙目艮 核的抑菌成分具有一定的热稳定性. 第4期 邹金美,黄冰晴,韦丽香,王栩,张国广:龙眼核提取物的抑菌活性研究 91 表3 pl-I对龙眼核提取物抑菌活性的影响 注:“一”表示无菌生长,“+”表示有菌生长 表4高温对龙眼核提取物抑菌活性的影响(mm) 注:同列中抑菌圈直径后不同字母表示差异显著(p<0.05),相同字母表示差异未达到显著水平(p>0.05) 4讨论 龙眼核提取物对供试病原菌中的7种菌具有很好的抑制活性,供试病原菌株中部分是食品常见污染菌, 龙眼核对它们生长的很好抑制活性提示其具有作为食品防腐剂的研究价值.供试8种病原菌中,大肠杆菌 ATCC35218和铜绿假单胞菌ATCC27853是两种分别能够产生TEM一1型和AmpC型p.内酰胺酶的抗性菌 株【J引,因此p一内酰胺类抗生素氨苄西林和头孢唑林对它们不具有抑制效果,但龙眼核提取物对ATCC27853 具有很好的抑制活性,对ATCC35218不具有抑制活性,这种差异应该由于二者分泌的p一内酰胺酶不同造 成的,且提取物对敏感大肠杆菌ATCC25922有抑制活性,提示龙眼核中是否含有TEM-1 13-内酰胺酶能够 降解的抑菌成分.黄晓冬【 l研究表明龙眼核95%乙醇提取物、丙酮提取物和乙酸乙酯提取物在浓度为100 mg/mL时对包括大肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色普通球菌、藤黄八叠球菌、白菜软腐菌 和甘蓝黑腐菌等7种细菌具有很好的抑制活性,其中以95%乙醇提取物抑菌活性最好,该研究中乙醇提取 物对大肠杆菌抑制效果最好,我们的研究中乙醇提取物对金黄色普通球菌抑制效果最好,推测这种差别是 由于所采用的供试菌株的不同带来的.另外我们的研究也表明龙眼核提取物对真菌白色念珠菌也具有抑制 效果,对4种丝状真菌中的秀珍菇和杏鲍菇抑制作用也较强,而对两种药用菌灵芝和北虫草的抑制作用较 弱,推测药用菌中含有龙眼核中的抑制真菌成分或其衍生物,以至于药用真菌对该抑制活性成分不敏感. 龙眼核中含有丰富的淀粉、还原糖、蛋白质、脂类、黄酮和多酚类物质¨ J,多酚类物质含量较多是柯 里拉京(corilagin)、没食子酸和鞣花酸【II5 J,其它多酚类物质如没食子酰一葡萄糖苷(monogalloyl—glucose)、 没食子酰.二葡萄糖苷(monogalloyl—diglucose)、鞣花酸一戊糖轭合物(ellagic acid—pentose conjugate)、原 花青素A型二聚体(procyanidin A—type dimer)、和槲皮素-3一O一鼠李糖苷(quercetin一3一O—rhamnoside)等 含量较低.据报道柯里拉京对白色假丝酵母有一定的抑制活性0 J,本研究中对假丝酵母和4种丝状真菌起 抑制作用的主要成分可能是柯里拉京,因真核细胞核和原核细胞的巨大差异,推测对几种原核病原菌起抑 制作用的可能是其它的物质,结果表明龙眼核中所含有的抑菌活性成分比较复杂,抑菌机制也多样化,有 必要进一步分离其活性成分及研究抑菌机制. 漳州师范学院学报(自然科学版) 2011钲 参考文献: 【l】Rangkadilok N,Worasuttayangkum L,Bennett RN,et a1.Identiifcation and quantiifcation ofpolyphenolic compounds in Longan (Euphoria longana Lam.)fruit[J].Journal ofAgricultural and Food Chemistry,2005,53:1387—1392. [2]肖更生,黄儒强,曾庆孝,等.龙眼核的营养成分[J]_食品科技,2004,l:93-94. 【3]贤景舂,陈美赢.超声提取龙眼核总黄酮量的工艺[j].食品研究与开发,2010,31(4):5—7. [4】文良娟,李英军,毛慧君,等.龙眼核的营养成分及其活性物质的抗氧化性能研究[JJ.食品科学,20 l 0,3 1(1):243—246. 【5]Rangkadilok N,Sitthimonchai S,Worasuttayangkurn L.Evaluation of free radical scavenging and antityrosinase activities of standardized longan rfuit extract[J].Food and Chemical Toxicology,2007,45:328—336 [6]Soong Y Barlow Philip J.Antioxidant activity and phenolic content of selected fruit seeds[J].Food Chemistry,2004,88: 4I1.4l7. [7】Soong Y Barlow PJ.Isolation and structure elucidation of phenolic compounds from Iongan(Dimocarpus ̄ngan Lou )seed by high—performance liquid chromatography electrospray ionization mass spectrometry[J].Journal of Chromatography A,2005, 1 085(2):270—277. [8]王淑霞,李爱梅,张俊杰,等.响应面分析法优化龙眼核中多酚物质提取工艺[J].食品科学,201 1,32(10):35—39. [9]黄儒强,刘学铭,曾庆孝.龙眼核提取物对a-葡萄糖昔酶抑制作用的研究[J]现代食品科技,2005,2 l(2):62—63. [10]黄儒强,邹宇晓,刘学铭.龙眼核提取液的降血糖作用[j].天然产物研究与开发,2006,18:991—992. [1l】黄儒强,刘学铭.龙眼核提取物提高小鼠抗氧化功能的研究[J].华南师范大学学报:自然科学版,2008,1:l08-1 I1. [12】黄晓冬.4种龙眼核提取物的总黄酮含量、体外抗菌活性与抗氧化活性[J].食品科学,201 1,32(1 1):43—47. 【1 3]赵斌,何绍江.微生物学实验【M】.北京:利学出版社,2002. [14]周邦靖.常用中药的抗菌作用及其测定方法[M].重庆:科学技术出版社重庆分社,1987. [1 5】National committee for clinical laboratory standards.Performance standards for antimict’obial susceptibility testing[S].twentieth information supplement,20 1 0,30(I):1 23. [1 6】Latte KP,Kolodziej H.Antifungal effects of hydrolyzable tannins and related compounds on dermatophytes,mould fungi and yeasts[J].Zeitschritt lfit Naturforschung,2000,55c:467-472. [责任编辑:陈丽】 

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