实验一 母种培养基配制
培养基是人工配制提供微生物生长的基质,食用菌是真菌,人工培养食用菌, 都要配制适合它们生长的培养基。栽培食用菌首先需要培养菌种,在食用菌栽培 中,一般菌种分三级:母种、原种和栽培种。
母种培养基常用于菌种分离、提纯、扩大及菌种保藏,广泛采用半合成培养 基。半合成培养基:就是化学成分部分确定,一部分不确定的培养基。
一.实验目的和要求
了解母种培养基的配方,熟悉母种培养基(PDA或PSA)的配制方法。 二.培养基配方:(PDA)
去皮马玲薯200g 葡萄糖20g 琼脂20g 水1000ml pH自然(6.8-7.0)
本培养基适合大多数食用菌菌丝生长。 三.实验器材、材料和用具
天平 电炉 1000ml搪瓷量筒 18x180试管
9ml培养皿 烧杯 长镊子 剪刀 玻璃棒 止水夹 纱布 棉花 橡皮圈 250ml三角瓶 牛皮纸 记号笔 标签纸 葡萄糖 琼脂 马玲薯 四.实验步骤与方法
1. 选好的马玲薯洗净去皮,发芽的要挖去芽眼,用小刀切成小块或薄片,称取
200g放入1000ml搪瓷量筒,加水少于1000ml水,加热煮沸到薯片酥而不烂时为
止(约10-20分钟),用二层或四层纱布过滤,取其滤液补足为1000ml,加入 20g琼脂,小火加热,用玻璃棒不断搅拌以防止培养基溢出和焦底,待琼脂 完全熔化时加入20g葡萄糖,搅拌溶解,最后补足培养基至1000ml.
我们每小组都不是配1000ml培养基,而是500ml同学们应该怎样操作?
2. 分装 琼脂在摄氏40度凝固,应在培养基凝固前分装,用分装装置分装。
(1)以右手食指及母指控制止水夹,左手拿试管,将分装装置玻璃管插入试管内,当培养基流入管内时,注意控制流量,使管内培养基的高度约为试管的
五分之一,分装过程中,勿使培养基沾到试管口,为什么?
(2)试管口塞上棉塞,将试管7支或10支一捆,在每捆的棉塞上包一层牛皮 纸,用橡皮圈或绳子扎好,竖放,待灭菌。
(3)将多余的培养基分装在250ml三角烧瓶内,每瓶100ml,塞上棉塞包一层牛皮纸,待灭菌。
(4)将9cm培养皿一包,待灭菌。
五.思考题
(1) 在日常生活中,食用菌一般称为菇或耳,你认识哪几种或吃过哪几种菇或
耳?
(2) 在试管口塞上棉塞有什么作用?
(3) 分装过程中,勿使培养基沾到试管口,沾上了会有什么影响,如何处理?
实验二 高压蒸汽灭菌、常压灭菌
灭菌是食用菌制种和熟料栽培一项关键技术,它关系到制种和栽培的成败。高压蒸汽灭菌和常压灭菌都是采用湿热灭菌的原理,湿热蒸汽比干热灭菌好:(1)热蒸汽比热空气穿透力强;(2) 湿热蒸汽对细胞成分的破坏作用更强;(3)蒸汽存在潜热,当气体变为液体时可放出大量热量,故可迅速提高灭菌物品的温度。
一.实验目的和要求
通过实验学习掌握手提式高压灭菌锅使用方法。
二.实验物品及用具
手提式高压灭菌锅 上一实验需灭菌的物品
三.操作步骤:
(1)先在外锅加入适量的水,然后将上一实验需要灭菌的物品放入内锅,管口或瓶口向上不要紧贴锅边,避免蒸汽冷凝水进入试管内或瓶内。
(2)盖上锅盖,盖时应将盖上的放气管插入内锅壁管孔内,然后按对称方式扭紧锅盖上的螺丝,并将盖上的放气阀打开(直立)。 (3)将灭菌锅放在电炉上加热,当锅内水煮开后即有气体从放气孔排出,待有大量热蒸汽排出时(也就是连续热蒸汽排出)再继续排气5-10分钟,然后关闭放气阀开始灭菌。 (4)当压力表指针到1kg/cm处时,开始计时,并让压力表指针始终保持此压力20-30分钟,然后去火,自然降温,待指针回到零时打开放气阀,然后将锅盖打开(对称方式松开螺丝。
(5)摆斜面 灭菌后待管内培养基温度冷却至摄氏50-60度时,将试管取出斜放在木条上,使试管内的培养基成一斜面,斜面的长度为试管长度的二分之一。
注:常压灭菌这次实验无法做,因为时间太长,一般需要8小时以上,如有机会以
后再和同学们说。
四. 思考题
1为什么第一和第二个实验要一起做,如果第二个实验不和第一个实验一起做,设想一下第一个实验的培养基会出现什么情况?
2为什么说灭菌是食用菌制种和熟料栽培一项关键技术,如果灭菌不彻底以后会出现什么情况?
实验三 食用菌母种分离技术
食用菌的孢子就相当于植物的种子,在自然界中,食用菌就靠孢子来繁殖后代的。但是在人工栽培时,人们至今都不用孢子直接播种,因为孢子很微小,很难在生产中直接应
用,而是用孢子或子实体组织、菌丝组织体萌发而成的纯菌丝体作为播种材料。人们通常所指的菌种,实际上就是指人工培养的纯菌丝体。
母种是指从大自然首次分离得到的纯菌丝体。并且是菌种生产的第一程序,因此又被称为一级种。纯菌丝体在试管斜面上再次扩大繁殖后,则形成再生母种,所以在生产上用的母种实际上都是再生母种,它即可以繁殖原种,又适合菌种保藏。
一.实验目的和要求
掌握食用菌母种的制作技术,学会母种的分离方法。
二.实验器材和原料
恒温培养箱 电炉 手术刀 接种针 接种铲 接种箱 酒精灯 长镊子 记号笔
标签纸 平菇种菇 香菇种菇 75%酒精棉球 PDA培养基 灭菌的培养皿
三.操作步骤
1. 种菇的选择:从产量高、长势好、适应性强、无杂菌、无病虫害的群体中选择菇
形正、朵大、菌盖厚实、生长健壮、八成熟的子实体作为分离材料。菇种应保持菇体洁净备用。
2. 组织分离:此法生产中最常用的方法,它操作简单、菌丝萌发快、分离所得的菌
种遗传性稳定,在培养条件适合的情况下,能保持原有菇种的优良性状和特性。
(1) 将上一实验准备的PDA三角瓶培养基用水浴熔化;
(2) 将上一实验准备的灭菌培养皿,每人二套,不要打开,在培养皿底皿
上用记号笔等分成四(划十); (3) 用75%酒精棉球擦菇体表面消毒;
(4) 用75%酒精棉球擦净双手,在接种箱内将菇体撕开,撕开的一面不能
接触箱体,菇体侧放;(由于我们人多,条件所限,只能在实验室做,只要操作得好成功率也是很高的。);
(5) 用消毒手术刀,待手术刀冷后,在菌盖与菌柄交接处的组织切取一小
块(约2x3mm),在酒精灯旁,将培养皿盖打开一小缝,便于操作即可,放入培养皿内适当位置,动作要快,减少污染机会。重复一次,
也就是放二小组织块,即用标签纸做好记号贴在培养皿底皿上。
3.孢子分类:此法是将子实体成熟后产出的孢子收集在培养基上,萌发并长成菌丝而
获得的纯菌丝体。
(1) 将接种环在酒精灯上消毒,要将接种环的金属丝烧红,冷却后
(2) 对准菇体的菌褶,插入菌褶轻轻抹两下,然后在培养皿另两处各点一下即可,做好记号。
香菇、平菇各做一培养皿,做好后放在摄氏25度恒温箱内倒置培养7天左
右,组织分离的即可进行转管扩大繁殖成母种,孢子分离的时间稍长些。
四.思考题;(1)食用菌母种分离成功的关键是什么?
(3) 培养皿为什么要倒置培养?
实验四 母种形态观察及扩大培养
同学们已经进行了母种的分离,这次我们来观察母种的生长情况,区分香菇、平菇菌丝体,观察它
们的形态。要用于生产,我们分离的菌丝体是远远不够的,那就要进行扩大培养。
一.实验目的和要求
初步了解食用菌菌丝体的形态,区分香菇和平菇菌丝体形态特征,掌握母种扩大培养的方法。 二. 实验器材和材料
恒温培养箱 接种铲 接种靶 接种箱 酒精灯 记号笔 标签纸 直尺 75%酒精棉球 香菇、平菇菌丝体培养皿
三. 操作步骤 1. 母种形态观察 (1) (2) (3)
从恒温培养箱内取出培养皿,记录分离实验成功与失败;
不要打开培养皿。用直尺分别测量香菇、平菇生长直径,来衡量菌丝体生长速度; 观察香菇、平菇菌丝体的形态特征;(参考描述 香菇; 菌丝洁白、细短、生长整齐、呈棉绒状、不产生色素、生长速度中等。平菇; 菌丝洁白、浓密、粗壮、生长整齐、爬壁力强、不产生色素。)
2. 母种扩大培养
培养皿接试管 (1) (2) (3)
双手洗净用5%酒精棉球擦手消毒,点燃酒精灯,右手拿接种铲,将接种铲顶端烧红,并将要伸进培养皿和试管的部分在火焰上来回过几次灭菌;
在酒精灯旁,左手拿起分离培养皿,大拇指和中指夹住培养皿盖,小拇指和无名指托住培养皿底皿,在要打开培养皿的皿盖处,在酒精灯过火几次,但不能对着烧;
在酒精灯旁,用大拇指和中指打开培养皿盖,打开大小以方便操作为宜,不能完全打开,待接种铲完全冷后伸入培养皿内,将直径最外边的菌丝体切成3x3mm或3x5mm大小的菌丝块;
(4)
将接种铲插在试管架上,盖上培养皿,拿一支斜面试管,拔松试管棉塞,按前方法拿好培养皿,将斜面试管放在培养皿上,用食指固定,用右手小拇指将试管棉塞取下夹住,试管口稍突出培养皿边缘,用火焰封住试管口,拿起接种铲在火焰上稍过一下火,伸入培养皿,冷却后,铲取一小块带培养基的菌丝块,迅速放入试管斜面中间菌丝面朝上,放下接种铲,将棉花塞塞好试管,贴上标签,标签上注明品种,接种时间和接种人。
试管接试管 这种方法是用于保藏菌种和外购菌种的扩大培养。 (1) (2)
与上法同;
左手平托两支试管,大拇指按住试管,一支是供接种用的菌种试管,另一支是待转接母种的斜面试管,两支试管的斜面朝上;
(3)
将两支试管的管口部分靠近火焰,用右手的小手指夹取一试管棉塞,再用无名指和小手指夹取另一棉塞,并立即以火焰灼烧管口,并适当转动,操作过程应在酒精灯火焰3cm远处进行;
(4)
用冷却的接种耙,将已长满菌丝的培养基分成0.5cm宽的菌丝块,再用接种铲铲一块0.3x0.5cm放入待接试管的斜面中间,菌丝面朝上。放下接种铲,将棉花塞塞好试管,贴上标签,标签上注明品种,接种时间和接种人。一般一支母种可扩接20-30支试管。
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