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纯蛋白的测定

2020-05-21 来源:榕意旅游网
纯蛋白的测定(真蛋白)

一、原理

硫酸铜在碱性溶液中,可将纯蛋白沉淀且不溶于热水。过滤和洗涤后,可将纯蛋白和非蛋白含氮物分离,在用凯氏定氮仪测定沉淀中蛋白的含量。 二、试剂

1.100g/l硫酸铜:10g溶解于100ml水中。 2.25g/l氢氧化钠:25g溶于1000ml水中。 3.10g/l氯化钡:1g溶于100ml水中。 4.0.1mol/l盐酸标液 三、测定方法

准确称取试样1g,于烧杯中,加水50mlz加热至沸。加20ml硫酸铜,加20ml氢氧化钠。充分搅拌放置1h以上过滤。用60—80℃热水洗涤沉淀10次。用氯化钡5滴和盐酸1滴检查滤液,至生成白色硫酸钡沉淀为止。将沉淀和滤纸一起放入65℃烘箱内2h(在105℃烘干水分就行),转至凯氏烧瓶中加入催化剂放在电炉上消煮。变色后再消化2.5h。后面步骤同粗蛋白一样。(从电炉上取下稍冷却一会就要马上转入100ml容量瓶中,否则容易结冰。 四、计算

(V2V1)*C*0.0140*6.25

纯蛋白(%)= ——————————————*100 M*V/V

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