关于western blotting,请各位高人指教
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发布时间：2022-04-24 08:19
共3个回答
热心网友
时间：2022-06-17 23:31
这种技术是把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测之。Western使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。这种技术的作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特异蛋白进行鉴别和鉴定。
蛋白Marker：预染或非预染各种分子量的蛋白，用于标示电泳中蛋白的大小和示踪
内参对照：管家基因编码的、很多组织和细胞中都稳定表达的蛋白，用于检测整个WB实验过程及体系是否正常工作，并作为半定量检测目的蛋白表达量的标准对照。
现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色。原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，将胶片进行扫描或拍照，用凝胶图象处理系统分析目标带的分子量和净光密度值。
热心网友
时间：2022-06-17 23:31
一句话就是检测你的样品中是否含有某种蛋白质以及该蛋白质的相对表达量。
热心网友
时间：2022-06-17 23:32
western blot主要是检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
定性：蛋白Marker只是从分子量的大小进行粗略的估计，western中用主要是通过抗目的蛋白的抗体来检测目的蛋白是否存在。
定量：如果存在目的蛋白，则会与相应的抗体发生结合，再通过标记的二抗与抗体结合，这样只要检测二抗上结合的酶量（一般是酶能使特定的底物显色，检测显色物间接测定酶的含量，或者是通过化学发光的方法检测），就可以可以测出蛋白的相对表达量了。
Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。 蛋白质印迹的发明者一般认为是美国斯坦福大学的乔治·斯塔克（George Stark）。在尼尔·伯奈特（Neal Burnette）于1981年所著的《分析生物化学》（Analytical Biochemistry）中首次被称为Western Blot。
参考资料：http://www.genebase.cn/NewsInfo.asp?id=92
